Desenvolvimento e validação de um método analítico para a determinação de histamina em vinhos utilizando cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência

Abstract

Recebido em 15/7/05; aceito em 2/5/06; publicado na web em 26/9/06 DEVELOPMENT AND VALIDATION OF AN ANALYTICAL METHOD FOR THE DETERMINATION OF HISTAMINE IN WINES USING HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY WITH FLUORESCENCE DETECTION. A rapid and efficient method for the analysis of histamine in wines using HPLC with fluorescence detection after derivatization was developed and validated. The method LOD and LOQ values were 0.25 and 0.50 mg L -1 respectively. The repeatability and intermediary precision for the instrument and for the method presented RSD values of 3.7 and 2.9%, and 6.0 and 5.6%, respectively. The recoveries were 95.5 and 89.9% for the fortification levels of 2 and 10 mg L INTRODUÇÃONos últimos anos, as novas tendências em segurança alimentar e a exigência do consumidor por alimentos saudáveis e de qualidade estão promovendo um aumento na pesquisa por constituintes presentes em alimentos e bebidas que podem afetar a saúde humana. Assim, a presença de substâncias que são fisiologicamente ativas no metabolismo humano tem sido extensivamente estudada em alimentos. Em vinhos, interesse especial tem sido dedicado às aminas bioativas ou biogênicas e, em particular, à histamina 1 . Embora estas substâncias estejam presentes no vinho geralmente em baixas quantidades, elas exibem interação com o metabolismo humano, fato que justifica a pesquisa. A histamina produz dilatação dos vasos sangüíneos e, conseqüentemente, cefaléia. A eliminação ou a redução desta substância nos vinhos tem sido uma prática cada vez mais utilizada em certos países 2 . A presença de histamina em vinhos está sendo relacionada às más condições higiênico-sanitárias no processo de produção, uma vez que esta substância é formada por algumas espécies de microorganismos. Devido a isso, é importante uma verificação do conteúdo de histamina em vinhos como forma de detectar possíveis falhas no processo de produção 3 . Entretanto, a quantificação de rotina destas substâncias não é utilizada no controle de qualidade dos vinhos, principalmente devido às dificuldades analíticas, como presença de interferentes e complexidade da matriz 4 . As técnicas de separação de aminas empregadas para a determinação de histamina em vinho incluem, principalmente, a cromatografia gasosa 5 (GC, "gas chromatography") e a cromatografia líquida de alta eficiência 6-11 (HPLC, "high performance liquid chromatography"), sendo que as duas técnicas são seletivas e sensíveis, permitindo a detecção de pequenas quantidades de aminas. A análise de aminas bioativas em alimentos por HPLC tem aumentado, já que oferece a vantagem de separação e quantificação simultânea de aminas 12 . No entanto, a maioria das aminas não apresenta absorção ultravioleta natural ou fluorescência. Por esta razão, a derivatização química é necessária para detectar as aminas por HPLC 13 . Os agentes derivatizantes mais utilizados na determinação por fluorescência de aminas bioativas são: cloreto de dansyl, ortoftaldeído (OPA) e fluorescamine. A principal vantagem que o reagente OPA apresenta em rela...

Otimização e validação de método para determinação de ácidos orgânicos em vinhos por cromatografia líquida de alta eficiência

“…15 Na Tabela 2 estão dispostos os resultados da precisão do instrumento e do método cromatográfico. Os valores de repetibilidade do instrumento e do método encontram-se abaixo dos limites máximos aceitos na validação de métodos cromatográficos, 5 e 15%, respectivamente, semelhantes, portanto, aos descritos por Kerem et al 11 que relataram repetibilidade das áreas dos picos cromatográficos inferiores a 5%.…”

“…A comparação entre as áreas dos analitos nas análises realizadas em dias diferentes não apresentou variação significativa (p < 0,01) para todos os ácidos orgânicos, o que demonstra a precisão intermediária do instrumento. 15 A robustez de um método avalia a sua sensibilidade a pequenas e deliberadas alterações. 16 Variações na preparação da fase móvel e de 10% na temperatura do forno e do fluxo da fase móvel não interferiram (p < 0,01) nas respostas dos ácidos orgânicos, diferentemente das alterações do comprimento de onda.…”

Tempo de vida útil de propelentes base-simples

“…Partindo-se do princípio que o processo de decomposição quí-mica siga uma cinética de pseudo-primeira 15 ordem, que obedece a Equação ln X f = In X i -kt (2) onde X f é a fração remanescente de estabilizante no propelente, X i a fração inicial de estabilizante no propelente, k = Constante cinética e t o tempo. A partir dos dados coletados, foram gerados os gráficos de ln X f vs t para a determinação da constante cinética relativa a cada temperatura de exposição da amostra.…”

Estudo de alcaloides harmânicos em sementes de Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Degener (maracujá azedo) por SBSE/CLAE-Flu dual

“…). A detecção por fluorescência pode dispensar uma extensa preparação da amostra (etapa de "clean up") para eliminação de interferentes (PRESTES et al, 2007).…”

“…A separação por CLAE e detecção por fluorescência apresenta um alto grau de especificidade devido à seletividade da CLAE e à sensibilidade do detector que é utilizado em análises de compostos que emitem fluorescência mesmo que presentes em baixas concentrações (PRESTES et al, 2007;VALENZUELA et al, 2001).…”