Congelação Do Sêmen Canino Comparando Diferentes Concentrações De Glicerol E Diferentes Tempos De Equilíbrio

Abstract

RESUMO -O objetivo deste trabalho foi estudar a concentração de glicerol e tempo de equilíbrio para congelação de espermatozóides caninos diluídos em Tris-Gema. Vinte cães serviram como doadores sendo estimulados por massagem peniana. Semanalmente colheu-se a fração rica sêmen até a obtenção de 20 pools (3 ejaculados/pool). Após a avaliação macro e microscópica, o pool foi dividido em 4 partes iguais e diluído em amostras de Tris-gema adicionado de 4, 6, 8 e 10% de glicerol respectivamente, pelo método "one step", à temperatura de 37ºC. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 ml permanecendo em equilíbrio a 4ºC por 1, 2, 3 e 4 horas, sendo então colocadas em vapor de nitrogênio líquido (N 2 ) por 15 minutos e posteriormente mergulhadas e, então, raqueadas e armazenadas em botijão criobiológico. A descongelação foi feita a 37 ºC por 30 segundos retirando-se uma alíquota para avaliação da motilidade, vigor e retenção acrossomal; o restante do sêmen foi incubado em banho Maria a 39 °C por até 4 horas para teste de termoresistência (TTR). Os melhores resultados pós-descongelação de motilidade (P <0,0001), vigor (P < 0,0008), retenção acrossomal (P < 0,04), e ttr (P < 0,01) foram obtidos com 8% de glicerol (P<0,0001) e 1 hora de equilíbrio.Palavras chave: Sêmen, cão, glicerol, tempo de equilíbrio.ABSTRACT -The aim of this study was to evaluate the glicerol concentration and the time of freezing equilibrium for the canine spermatozoa diluted in TRIS-yolk. Twenty dogs served as donors and were stimulated by penis massage. Only the rich fraction of the ejaculated fluid was weekly collected until 20 pools were obtained (3 ejaculates / pool). Following macroscopic and microscopic evaluation, the pool was divided in 4 parts and diluted in different samples of TRIS-yolk extender at 4, 6, 8 and 10% of glycerol concentration respectively, using the "one step" method at 37ºC. These samples were packed in 0.5 ml straws and kept for 1, 2, 3 and 4 hours at 4 ºC, followed by 15 minutes in nitrogen vapor, then immersed in liquid nitrogen and kept in cryobiologic bottle. The thawing step was carried out for 30 seconds at 37 ºC. A semen aliquot was used to evaluate the motility vigor and acrossomal retention and the remaining was incubated in water bath at 39°C up to 4 hours for TTR (test of thermal resistence). The best post-thawing results of motility (P < 0.0001), vigor(P < 0.0008), acrossomal retention (P < 0.04) and ttr (P < 0.01) were obtained with 8% of glicerol concentration (P <0.0001) and 1 hour of cooling-off.Key words: Semen, dog, glycerol, cooling-off period. IntroduçãoCrioprotetor: O sucesso da criopreservação do sêmen canino é afetado por muitas variáveis, incluindo-se o potencial tóxico do agente crioprotetor, particularmente relativo a concentração, duração e a temperatura em que o sêmen é exposto ao crioprotetor. Na maioria dos protocolos desenvolvidos para a criopreservação espermática, o glicerol é o agente mais utilizado, variando grandemente entre as espécies, sendo que a concentração ideal é freqüentemen...

Efeito de meios diluidores na congelabilidade do semen canino

“…Diversos autores citam resultados diferentes ao observado no nosso estudo, no grupo TRIS-gema. Santos et al (2003) ao testarem a concentração de glicerol no meio Tris-gema, para congelação de espermatozoides caninos, verificaram que a adição de 8%, o parâmetro de MT foi de 58 %.…”

Comparação entre duas concentrações de glicerol para a criopreservação de sêmen de suçuarana (Puma concolor)

“…O glicerol é um crioprotetor extremamente eficiente, cuja toxidade é influenciada pela concentração usada, temperatura a qual foi adicionado à amostra e da espécie estudada (Fahy 1986, England 1993, Nelson et al 1999, Holt 2000, Santos et al 2003, Pesch & Bergmann 2006. Stander-Breedtet al (2004) testaram o efeito do glicerol e do DMSO nas concentrações 4 e 8% para congelamento de sêmen em leão (Panthera leo), e não observaram diferenças significantes na motilidade espermática, após o descongelamento entre os quatro tratamentos.…”

“…O crioprotetor usado rotineiramente (glicerol) promove proteção às células das consequências da cristalização ao aumentar a fração de água não congelada no meio extracelular. Porém sabe-se que ele, em determinadas concentrações e temperaturas, apresenta efeito tóxico sobre o espermatozoide, embora esta toxicidade varie significativamente entre as espécies (Fahy 1986, England 1993, Nelson et al 1999, Holt 2000, Santos et al 2003, Pesch & Bergmann 2006.…”