Clonaje y caracterización molecular in silico de un transcrito de fosfolipasa A2 aislado del veneno de la serpiente peruana Lachesis muta

Abstract

Objetivo. Aislar y caracterizar in silico un transcrito del gen de fosfolipasa A 2 (PLA 2 ) aislado del veneno de Lachesis muta de la Amazonía peruana. Materiales y métodos. Se amplificó el transcrito del gen sPLA 2 mediante la técnica de RT-PCR a partir de RNA total utilizando cebadores específicos, el producto de DNA amplificado se insertó en el vector pGEM para su posterior secuenciación. Mediante análisis bioinformático de la secuencia nucleotídica se determinó un marco de lectura abierta de 414 nucleótidos que codifica 138 aminoácidos, incluyendo16 aminoácidos del péptido señal, el peso molecular y el pI fueron de 13 976 kDa y 5,66 respectivamente. Resultados. La secuencia aminoacídica denominada Lm-PLA 2 -Perú, contiene Asp49, así como Tyr-28, Gly-30, Gly-32, His-48, Tyr52, Asp99 importantes para la actividad enzimática. La comparación de Lm-PLA 2 -Perú con las secuencias aminoacídicas de los bancos de datos mostró 93% de similitud con las sPLA 2 de Lachesis stenophrys y más del 80% con otras sPLA 2 de venenos de la familia Viperidae. El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica del transcrito del gen sPLA 2 indica que Lm-PLA 2 -Perú se agrupa con otras sPLA 2 [Asp 49 ] ácidas previamente aisladas del veneno de Bothriechis schlegelii con un 89% de identidad. El modelaje tridimensional de Lm-PLA 2 -Perú, presenta una estructura característica de sPLA 2 del Grupo II formada por tres hélices-α, una lámina-β, una hélice corta y un lazo de unión con calcio. Conclusión. La secuencia nucleotídica corresponde al primer transcripto del gen de PLA 2 clonado a partir del veneno de la serpiente Lachesis muta, que habita en la selva del Perú. Palabras clave: Fosfolipasas A 2 ; Lachesis muta; Venenos de serpiente; Clonación molecular; Biología computacional (fuente: DeCS BIREME). MOLECULAR CLONING AND CHARACTERIZATION IN SILICO OF PHOSPHOLIPASE A 2 TRANSCRIPTO ISOLATED FROM Lachesis muta PERUVIAN SNAKE VENOM ABSTRACTObjective. Isolate and characterize in silico gene phospholipase A 2 (PLA 2 ) isolated from Lachesis muta venom of the Peruvian Amazon. Material and methods. Technique RT-PCR from total RNA was using specific primers, the amplified DNA product was inserted into the pGEM vector for subsequent sequencing. By bioinformatic analysis identified an open reading frame of 414 nucleotides that encoded 138 amino acids including a signal peptide of 16 aminoacids, molecular weight and pI were 13 976 kDa and 5.66 respectively. Results. The aminoacid sequence was called Lm-PLA 2 -Peru, contains an aspartate at position 49, this aminoacid in conjunction with other conserved residues such as Tyr-28, Gly-30, Gly-32, His-48, Tyr52, Asp99 are important for enzymatic activity. The comparison with the amino acid sequence data banks showed of similarity between PLA 2 from Lachesis stenophrys (93%) and other PLA 2 snake venoms and over 80% of other sPLA 2 family Viperidae venoms. A phylogenetic analysis showed that Lm-PLA 2 -Peru grouped with other acidic [Asp 49 ] sPLA 2 previously isolated from Bothriechis schlegel...

PURIFICACIÓN Y ALGUNAS PROPIEDADES BIOQUÍMICAS Y MOLECULARES DE UNA NUEVA FOSFOLIPASA A2 NO MIOTÓXICA DEL VENENO DE LA SERPIENTE Bothrops atrox

“…Para la síntesis de ADNc se obtuvo 541 ng/μL, a partir de veneno liofilizado y 762,5 ng/μL de tejido glandular. Por otra parte, en la amplificación del gen de BaPer-PLA 2a se obtuvo un producto de ~480 pb (figura 3), tamaño que es comparable a otros amplificados de 448 pb en L. muta 6 , 417 pb de B. pauloensis 1 y de 414 pb en B. moojeni 19 .…”