PURIFICACIÓN Y ALGUNAS PROPIEDADES BIOQUÍMICAS Y MOLECULARES DE UNA NUEVA FOSFOLIPASA A2 NO MIOTÓXICA DEL VENENO DE LA SERPIENTE Bothrops atrox

Abstract

Las fosfolipasas A2 (PLA2 ) del veneno de las serpientes, son enzimas con una variedad de efectos biológicos, debido a sus diferentes isoformas y algunas pudiendo ser miotoxinas. El objetivo de la investigación fue purificar, caracterizar y evaluar la actividad miotóxica de una isoforma de PLA2 ácida (BaPer-PLA2a). Se purificó por DEAE Sephadex-A50, Sephadex-G75 y un sistema automatizado de presión media-NGC. La BaPer-PLA2a tuvo una actividad específica de 34,1 U/mg y un peso molecular de ~14,5 kDa por PAGE-SDS en condiciones no reductoras. Del veneno se obtuvo el ARN total, para la síntesis de ADNc y un amplificado de ~480 pb. Se dedujo de la secuencia de ADNc una proteína madura de 124 aminoácidos con un punto isoeléctrico (4,41), siendo una isoforma ácida, asimismo presentó una estructura primaria con regiones conservadas y los residuos His48, Asp49 y Tyr52 identificados en el centro catalítico. Adicionalmente, el modelo teórico estructural posee una identidad mayor al 70 % con otras PLA2 ácidas. Finalmente, la BaPer-PLA2a no presenta actividad miotóxica, sin embargo, al combinarla con la isoforma de PLA2 básica incrementó la actividad miotoxina de esta última en 21,58 %.

Comparison of Four Methods of RNA Extraction and cDNA Synthesis from The Venom of Peruvian Snakes of the Genus Bothrops of Clinical Importance

“…We amplified cDNA transcripts encoding K49-PLA2s, D49-PLA2s, TLEs, P-I and P-III SVMPs, and DIS. Other works have also amplified cDNA from venoms of the snakes included in this study, which has allowed the molecular characterization of the BaMtx [ 14 ], Barnettobin [ 27 ], Pictobin [ 29 ], Atroxlysin-III [ 25 ], Hyal-Ba [ 30 ], Bpic-LAAO [ 20 ], Pictolysin-III [ 17 ], and BaPer-PLA2 [ 26 ].…”

“…Considering all available data as reference, our laboratory has been successfully characterizing several proteins from Peruvian B. pictus , B. barnetti , and B. atrox venoms at the molecular level, using venom-derived RNA [ 14 , 24 , 25 , 26 , 27 ]. Now, we believe that, in addition to molecular identification, venom-derived RNA has a potential for RNA-based technologies such as cDNA library construction, transcriptomics, gene expression analysis, and recombinant protein synthesis.…”

Actividad antiinflamatoria in vitro de Plantago major L. y Piper aduncum L. sobre la fosfolipasa A2 del veneno de la serpiente Lachesis muta muta

“…We determined PLA2 activity by measuring the clotting time of a 45% egg yolk emulsion with 10 mM Tris HCl buffer and 10 mM calcium chloride pH 7.4, after incubation with 0.125 mg/mL of L. muta muta venom for 10 min at 37 °C 6 .…”

“…The venom of the snake Lachesis muta muta , which inhabits the Peruvian jungle and is known as “shushupe”, has high PLA2 activity. For this reason, the search for inhibitors of this enzyme is proposed as an alternative to understand the mechanism of the anti-inflammatory process 6 .…”

Determinación De La Eficiencia De Secreción De Una Proteína Recombinante en La Levadura S. Cerevisiae Mediante Análisis Electroforético Y Detección Por Western Blot

“…Finalmente, todas las muestras fueron tratadas a 96 °C por 5 min. Para las separaciones electroforéticas (SDS-PAGE) se siguió un procedimiento similar al descrito por el Dr. Armando Yarlequé y colegas 15,16 .…”