BIOCHEMICAL DIFFERENTIATION AMONG S. aureus, S. Intermedius AND S. hyicus ISOLATED FROM BOVINES WITH SUBCLINICAL MASTITIS

Abstract

RESUMO -Staphylococcus aureus é, entre as espécies de estafilococos, a mais relacionada a infecções em animais e humanos, bem como a doenças de origem alimentar. Entretanto, S. intermedius e S. hyicus, duas espécies com características morfológicas muito similares a S. aureus, também podem causar doenças, bem como produzir enterotoxinas em alimentos, tornando importante a diferenciação entre essas três espécies de estafilococos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência de oito técnicas bioquímicas com relação à sua capacidade para distinguir entre S. aureus, S. intermedius e S. hyicus. Para isso, 65 cepas, previamente identificadas em nível de espécie através de técnicas moleculares, foram submetidas aos testes de produção de pigmentos carotenóides, atividade hemolítica em ágar sangue, produção de β-galactosidase, produção de acetoína, atividade lipolítica em polisorbato, fermentação aeróbica da maltose, fermentação anaeróbica do manitol e crescimento em ágar Baird-Paker e ágar P suplementados com acriflavina.Verificou-se que os testes de sensibilidade a acriflavina e de produção de β-galactosidase apresentaram bom poder discriminatório, demonstrando serem os melhores testes bioquímicos para a diferenciação entre essas três espécies de estafilococos.Palavras-chave: S. aureus, S. intermedius, S. hyicus, diferenciação bioquímica.ABSTRACT -Among staphylococcus species, Staphylococcus aureus is the one mostly related to animal and human infections, as well as food diseases. However, S. intermedius and S. hyicus, two species with very similar morphological characteristics to S. aureus, can also cause diseases as well as produce enterotoxins in food, what makes important the differentiation of these three species. The aim of this work was to study the efficiency of eight biochemical techniques regarding their capacity to distinguish among S. aureus, S. intermedius and S. hyicus. For that purpose, sixty five strains, previously identified at species level through molecular techniques, were submitted to the tests of carotenoid pigments production, hemolytic activity in blood agar, β-galactosidase production, acetoin production, lipolytic activity in polysorbate, maltose aerobic fermentation, manitol anaerobic fermentation and growth in Baird-Parker and P agar supplemented with acriflavine. It was verified that tests of sensitivity to acriflavine and β-galactosidase production display good distinguishing properties, constituting as a whole, the best biochemical tests for the identification of these three staphylococcus species.

Molecular Epidemiology and Antimicrobial Resistance Mechanisms of Methicillin-ResistantStaphylococcus aureusIsolated from Bovine Milk

“…Staphylococci isolated from bovine milk samples were identified on the basis of colony characteristics, Gram stain, pigment production, haemolysis on 7% sheep blood agar and following biochemical reactions: catalase activity, coagulase production (tube coagulase test, rabbit plasma), oxidase test, acetoin production (MR‐VP broth; Oxoide, Hampshire, UK), ortho ‐nitrophenyl‐b‐ d ‐galactopyranoside test (Sigma, Taufkirchen, Germany), bacitracin resistance (0.04 unit disc), mannitol‐fermenting on Chapman Agar (Merck 1.05469) and polymyxin B (300 unit disc) resistance. Gram‐positive, catalase‐positive, coagulase‐positive, oxidase‐negative, bacitracin‐resistant, haemolytic, acetoin production‐positive, β galactosidase‐negative, mannitol‐fermenting and polymyxin B‐resistant staphylococci were identified as S. aureus (Quinn et al., 1994; Gandra et al., 2005).…”

Perfil de resistência de isolados de Staphylococcus aureus obtidos de produtos de origem animal analisados pelo Serviço de Inspeção Federal do Brasil

“…Colônias suspeitas, em ágar Baird Parker, foram confirmadas de acordo com características definidas na metodologia oficial do MAPA, ou seja, crescimento típico ou atípico em ágar Baird Parker, coloração de Gram, produção de catalase, coagulase e produção de termonuclease. Colônias confirmadas foram submetidas à caracterização bioquímica suplementar: capacidade de crescimento em Agar Baird Parker suplementado com 7 µg/mL de acriflavina, produção de beta-galactosidase em caldo ONPG -Ortho-Nitrophenyl-beta-galactoside, capacidade de produção de pigmentos carotenóides em Agar PCA 1 (Plate Count Ágar) e capacidade de metabolizar maltose em aerobiose e manitol em anaerobiose [9,14,24]. Quando apresentavam as seguintes características: resistência à acriflavina, positividade na prova de coagulase e capacidade de fermentar manitol em anaerobiose, formando ácido, os isolados foram considerados S. aureus [9,13,14,25].…”

“…Colônias confirmadas foram submetidas à caracterização bioquímica suplementar: capacidade de crescimento em Agar Baird Parker suplementado com 7 µg/mL de acriflavina, produção de beta-galactosidase em caldo ONPG -Ortho-Nitrophenyl-beta-galactoside, capacidade de produção de pigmentos carotenóides em Agar PCA 1 (Plate Count Ágar) e capacidade de metabolizar maltose em aerobiose e manitol em anaerobiose [9,14,24]. Quando apresentavam as seguintes características: resistência à acriflavina, positividade na prova de coagulase e capacidade de fermentar manitol em anaerobiose, formando ácido, os isolados foram considerados S. aureus [9,13,14,25]. Isolados confirmados foram estocados em Caldo Infusão de Cérebro e Coração (BHI) acrescido de 20% de glicerol a -20°C.…”

Prevalence and expression of staphylococcal enterotoxin genes inStaphylococcus aureusisolated from food poisoning outbreaks

“…All isolates and reference strains were previously purified using Baird Parker agar (CM0961; Thermo Scientific, Hampshire, United Kingdom). The isolates were phenotypically characterized as S. aureus as described by Brito et al (2002) and Gandra et al (2005).…”