O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de sacarose e índices de pH no crescimento in vitro de Oncidium flexuosum. As plântulas foram cultivadas em meio de cultura MS/2 para testar os efeitos da sacarose (0, 15, 30, 45 e 60 g.L-1) e pH (5,0, 5,8, e 6,6) no seu desenvolvimento, em função das variáveis: altura da parte aérea (APA), número de raízes (NR), comprimento da maior raiz (CMR), número de folhas (NF) e massa fresca (MF). As concentrações de 15 e 30 g.L-1, independentemente do pH, foram as mais eficientes para a cultura in vitro da espécie, pois promoveram um aumento no comprimento das raízes, altura e massa fresca das plântulas. O pH foi significativo somente em combinação com 15 g.L-1de sacarose para o comprimento da maior raiz e massa fresca.