Análise por SDS-PAGE e Western blot de antígenos somáticos e extracelulares de Corynebacterium pseudotuberculosis

Abstract

<span class="texto">Diferentes técnicas para isolar e descrever antígenos das frações secretadas de superfície e somáticas de Corynebacterium pseudotuberculosis foram estudadas por SDS-PAGE e imunoblot, utilizando-se pool de soros de cabras naturalmente infectadas. Os antígenos secretados foram obtidos do sobrenadante de cultura da bactéria cultivada em meio quimicamente definido ou em meio BHI (Brain Heart Infusion). A fração de superfície foi obtida por tratamento com NaCl 1M, e as frações somáticas foram obtidas por vários procedimentos (detergentes e ultra-som). Pela coloração por Coomassie blue, foram detectadas 20 bandas na fração secretada, 35 bandas no extrato de superfície e entre 40 e 50 bandas, a depender do processo de extração, na fração somática. Entre todas as frações estudadas, foram detectadas 16 proteínas imunorreativas. As bandas com pesos moleculares de 125, 108, 75, 68, 41, 40, 31 e 24 kDa foram reconhecidas com maior intensidade e todas elas foram encontradas na fração secretada. A utilização do meio quimicamente definido permitiu revelar, na fração secretada de C. pseudotuberculosis, a presença de proteínas de alto peso molecular que não tinham sido previamente descritas.</span>

Humoral and cellular immune responses in mice against secreted and somatic antigens from a Corynebacterium pseudotuberculosis attenuated strain: Immune response against a C. pseudotuberculosis strain

“…So was found to induce higher levels of IL-10 than Se, probably due the structural components of So, such as cytoplasm and membrane lipoproteins [31]. …”

Haptoglobin and fibrinogen concentrations and leukocyte counts in the clinical investigation of caseous lymphadenitis in sheep

“…ELISA for detection of C. pseudotuberculosis‐ specific IgG antibodies is reported to have a specificity of 98.5% and sensitivity of 93.5% . Various bacterial antigens have been identified and tested to enhance the sensitivity and specificity of serologic tests . However, assays for antibodies still fail to identify all infected animals, as many have a low‐level humoral response against the bacteria .…”

“…4,6,7 Various bacterial antigens have been identified and tested to enhance the sensitivity and specificity of serologic tests. [8][9][10] However, assays for antibodies still fail to identify all infected animals, as many have a low-level humoral response against the bacteria. 11 Detection of interferon (IFN)-c in blood following exposure to bacterial antigens has been reported to be a very specific marker of CLA, but the finding of animals that produce low and high levels of IFN-c makes improvement of these tests imperative.…”

Desenvolvimento de ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto na detecção de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em ovinos (Ovis aries, Linnaeus, 1758)

“…Hoje em dia têm sido utilizados inúmeros testes sorológicos, como teste de imunodifusão em gel (BURREL, 1980), inibição sinérgica da hemólise , microaglutinação (MENZIES; MUCKLE, 1989), western-blotting (TER LAAK et al, 1992;PAULE et al, 2004), fixação do complemento (SHIGIDI et al, 1979) e vários ELISA (MENZIES et al, 1994;DERCKSEN et al, 2000). Vários testes para sorodiagnóstico baseados nos preparos crus de células totais mortas, extratos de parede ou toxóides do filtrado de cultivo têm pobre especificidade e frequentemente geram resultados falso-positivos MUCKLE, 1989).…”

“…As proteínas encontradas no sobrenadante da cultura do C. pseudotuberculosis em caldo BHI e reconhecidas através do Western blotting têm peso molecular abaixo de 68 KDa e, portanto, são facilmente reconhecidas pelos anticorpos produzidos pelos ovinos e caprinos (MUCKLE et al, 1992;TER LAAK et al, 1992). Paule et al (2004) pseudotuberculosis e a sensibilidade e especificidade foram 93,5% e 100%.…”