Estimativa da incerteza em ensaio de detecção de endotoxina bacteriana pelo método de gelificação

Abstract

Desde a publicação da ISO 17025:1999, o interesse em métodos para estimativa da incerteza em ensaios qualitativos, do tipo "passa/ não passa", têm ganho grande importância. Uma forma de estimar e informar a incerteza deste tipo de ensaio é o uso das probabilidades de respostas-falsas, particularmente falsos-positivos e falsos-negativos, determinados a partir do teorema de Bayes. O objetivo deste artigo é estabelecer um método para a estimativa de incerteza em ensaios de detecção de endotoxina bacteriana pelo método in vitro Limulus Amebocyte Lysate (LAL). Considerando a confirmação da sensibilidade do LAL e a validação do teste, a probabilidade de uma resposta falsa corresponde à soma da probabilidade dos resultados falso-negativos e falso-positivos. A partir dos resultados obtidos foi verificado que a etapa da confirmação da sensibilidade do LAL contribui para a incerteza de forma mais significativa (67,6%) que a etapa de validação do teste (32,4%). Através de um procedimento simples, descrito neste artigo, e de dados obtidos a partir da confirmação da sensibilidade do LAL e validação do teste para um produto em questão é possível obter uma estimativa de incerteza razoável para o ensaio de detecção de endotoxinas bacterianas pelo método de gelificação.

Determinação de endotoxina bacteriana (pirogênio) em radiofármacos pelo método de formação de gel. Validação

“…[17,20] Para o método de formação de gel com critério de aceitação passa ou não passa, estudos de estimativa da incerteza de medição são importantes para a verificação das probabilidades de respostas falsas, particularmente falsos-positivos e falsos-negativos. [35] Todos os lotes com resultados válidos para o método de formação de gel foram analisados pelo método cromogênico e alguns também foram submetidos ao ensaio turbidimétrico. Entre os reagentes liofilizados, o Fitato e o GHA apresentaram interferência com resultados não válidos no método de formação de gel e foram avaliados nos métodos cinéticos cromogênico e turbidimétrico para verificar a influência das diluições nos resultados.…”

Métodos espectrofotométrico, RP-UPLC e microbiológico para determinação de linezolida em formas farmacêuticas

“…Na técnica cromatográfica, quanto menor o tamanho da partícula interna que reveste a coluna cromatográfica, maior o número de pratos teóricos, ou seja, é mais eficiente a separação das substâncias que eluem próximas. (CIOLA, 1998, SKOOG et al, 2002 (ANGLOV et al, 2003, LEITO et al, 2002, LOURENÇO et al, 2005, LOURENÇO 2012, LOURENÇO et al, 2004, LOURENÇO et al, 2007, NIEMI et al, 2001, SOOVÄLI et al, 2006, LOURENÇO 2013, OKAMOTO et al, 2013, HSU 2010.…”

“…As variáveis comuns, que podem influenciar o espectro de absorção de uma substância, incluem a natureza do solvente, o pH da solução, a temperatura, as concentrações de eletrólitos e a presença de substâncias interferentes (SKOOG et al, 2002 (CHAMBERS 2006, BUTLER et al, 2011. Os métodos reportados na literatura para a determinação de linezolida incluem espectrofotometria em UV, HPLC usando detecção em UV e fluorescência, eletroforese capilar, TLC seguida de análise densiométrica e ensaios microbiológicos (LOPES et al, 2010, BORNER et al, 2001, MOHAPATRA et al, 2011, LOPES et al, 2009 (ANGLOV et al, 2003, LEITO et al, 2002, LOURENÇO et al, 2005, LOURENÇO 2012, LOURENÇO et al, 2004, LOURENÇO et al, 2007, NIEMI et al, 2001, SOOVÄLI et al, 2006, LOURENÇO 2013, OKAMOTO et al, 2013, HSU 2010.…”

“…planejamento fatorial e a metodologia de superfície resposta (RSM) têm sido pouco usados no desenvolvimento dos ensaios microbiológicos (SAVIANO et al, 2014. O planejamento fatorial e a metodologia de superfície resposta (NIEMI et al, 2001, BRÜGGEMANN et al, 2002, CHUI et al, 2002, LEITO et al, 2002, ANGLOV et al, 2003, WUNDERLI, 2003, LOURENÇO et al, 2004, LOURENÇO et al, 2005, SOOVÄLI et al, 2006, LOURENÇO et al, 2007, HSU, 2010, LOURENÇO, 2012, WEITZEL, 2012.…”

Desenvolvimento de métodos microbiológicos rápidos (MMRs) para avaliação da potência de agentes antimicrobianos e suas incertezas de medição

“…EURACHEM/CITAC, 2012). A incerteza de medição de um resultado pode surgir de muitas fontes, incluindo fatores como amostragem, efeitos da matriz e interferentes, condições ambientais, incerteza proveniente de balanças e equipamentos volumétricos, incerteza proveniente de equipamentos espectrofotométricos e cromatográficos, incertezas provenientes da resposta biológica e microbiológica, pureza de reagentes e substâncias químicas de referência, validação de métodos e erros aleatórios (NIEMI e NIEMELÃ, 2001;BRÜGGEMANN e WENNRICH, 2002;CHUI et al, 2002;LEITO et al, 2002;ANGLOV et al, 2003;WUNDERLI, 2003;LOURENÇO et al, 2004, LOURENÇO et al, 2005, SOOVÄLI et al, 2006LOURENÇO et al, 2007, HSU e CHEN, 2010LOURENÇO, 2012;LOURENÇO et al, 2012, WEITZEL, 2012LOURENÇO, 2013;SAVIANO e LOURENÇO, 2013;GHISLENI et al, 2014; OSTRONOFF e LOURENÇO, 2015).…”