Padronização de método analítico para avaliação do grau de exposição da fenilalanina em hidrolisados de caseína, por espectrofotometria derivada segunda

Abstract

Hidrolisados protéicos com baixo teor ou isentos de fenilalanina (Phe) têm sido empregados em formulações para fenilcetonúricos. Várias condições de hidrólise enzimática têm sido propostas na literatura para promover a liberação de Phe e, assim, facilitar sua remoção posterior. Neste trabalho, a espectrofotometria derivada segunda (EDS), um método analítico rápido, simples e de custo relativamente baixo, foi utilizada, inicialmente, para a caracterização dos aminoácidos aromáticos e, em seguida, para a determinação do grau de exposição da Phe em diferentes hidrolisados de caseína, obtidos pela ação da papaína. Os resultados obtidos indicam que o hidrolisado preparado à temperatura de 37 °C, relação enzima/substrato de 4%, pH 7,5, foi o que apresentou o maior grau de exposição da Phe, sendo o mais indicado para a preparação de dietas para fenilcetonúricos. Com relação à caracterização dos aminoácidos aromáticos, o emprego da EDS permitiu a separação dos picos de tirosina (Tyr) e triptofano (Trp), em pH 13,0. Além disso, observou-se semelhança entre os espectros de derivada segunda das soluções contendo somente os aminoácidos aromáticos e dos hidrolisados de caseína.

Use of activated carbon for removing phenylalanine from reconstituted skim milk powder hydrolysates

“…2). The correlation coefficient and the curve equation were y ¼ 2:1748x þ 0:3913 and R 2 ¼ 0:9921: This result is in agreement with others in the literature (Ichikawa & Terada, 1977;Zhao, Sannier, Garreau, Lecoeur, & Piot, 1996) and also with a previous study carried out in our laboratory (Barbosa et al, 2002), since in all these works a linearity for the standard curve of Phe, in presence of Tyr and Trp in several concentrations, was shown.…”

“…The similarity among the spectra of standard amino acids and proteins had previously been described by Ichikawa and Terada (1977), working with several native and denaturated proteins. The same result was previously achieved in our laboratory using papain for hydrolysing casein (Barbosa et al, 2002).…”

“…The absorbance of the filtrates were measured from 250 to 280 nm, the second derivative spectra were drawn and the areas or heights of negative peaks were used to calculate the exposure rate (ER) of Phe, employing the standard curve of Phe. Considering that no acid hydrolysis was performed, these results correspond to Phe that was exposed by the enzymatic hydrolysis (Barbosa et al, 2002). The best condition for Phe removal was the one that produced the highest percentage of ER, calculated according to…”

“…In our group's more recent work, a study of second derivative spectra of aromatic amino acids was carried out in two pH values (7.0 and 13.0), and SDS was used for estimating the degree of Phe exposure in casein hydrolysates prepared by using papain (Barbosa et al, 2002).…”

Perfil peptídico de hidrolisados enzimáticos de leite em pó desnatado

“…A técnica de SE-HPLC, utilizada no presente trabalho, mostrou ser eficiente na caracterização de hidrolisados protéicos, especialmente quando o interesse está voltado para o fracionamento de peptídeos de baixas massas moleculares, ou seja, inferiores a 1000 Da (Silvestre et al, 1994a;Léonil et al, 2000;Morato et al 2000, Carreira et al, 2001Barbosa et al, 2002).…”