A importância do diagnóstico laboratorial clássico na identificação de variantes de hemoglobinas

Abstract

As hemoglobinopatias podem ser resultantes de mutações que afetam os genes reguladores promovendo um desequilíbrio no conteúdo quantitativo das cadeias polipeptídicas e conseqüentemente nos tipos normais de Hb, causando as talassemias, ou, ainda, de alterações envolvendo genes estruturais que promovem a formação de moléculas de Hb com características bioquímicas diferentes das Hb normais, também denominadas Hb variantes. 1 Mais de 800 variantes de Hb já foram descritas até o momento. 2 A maioria delas é originada por simples substituições de aminoácidos, resultantes de mudanças nas seqüências de nucleotídeos. 1 Atualmente, o número de Hb anormais identificadas tem aumentado devido à melhoria nas metodologias de análises; no entanto, muitos laboratórios de rotina não estão preparados para a correta identificação das Hb variantes. Deste modo, objetivou-se caracterizar os mutantes de Hb das amostras de sangue enviadas ao Laboratório de Hemoglobinas e Genética das Doenças Hematológicas (LHGDH), utilizando-se diversas metodologias de análises para evidenciar sua aplicabilidade.Foram analisadas 83 amostras de sangue periférico colhidas com EDTA, após consentimento informado, provenientes de diferentes estados brasileiros e da Colômbia, sem distinção de sexo, idade, etnia ou classe social.As amostras foram avaliadas pelos testes para identificação de hemoglobinopatias que consistiram da análise da morfologia eritrocitária; resistência globular osmótica em NaCl a 0,36 %; eletroforese em pH alcalino em acetato de celulose; eletroforese em gel de ágar, pH ácido e cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) em Sistema Variant automatizado da Bio-Rad com kit de análise para beta talassemia heterozigota. 1,3,4,5,6 Para a identificação das cadeias globínicas mutantes foram realizadas as metodologias de eletroforese de cadeias em pH alcalino em acetato de celulose e eletroforese de cadeias globínicas em pH ácido em gel de poliacrilamida 12%. 7,8 Após a realização dos procedimentos clássicos para o diagnóstico de hemoglobinopatias, verificou-se a presença de Hb com padrões de migração diversos, sendo que 37 (45%) delas migraram em posição semelhante à Hb S em pH alcalino. Após a combinação dos resultados obtidos nas metodologias clássicas citadas, as Hb variantes foram submetidas a análises para definição da cadeia globínica alterada.Foram realizadas as eletroforeses de cadeias globínicas em pH ácido e pH alcalino. Em pH ácido, a maioria dos mutantes não apresentou separação das globinas normais (α A β A ), sendo possível reconhecer a fração mutante de Hb C, utilizada como padrão para esses procedimentos eletroforéticas, Hb E Saskatoon, Hb J Oxford e Hb Hasharon, sendo as duas primeiras mutantes de globina beta e as outras, mutantes de globina alfa. Também foram detectadas as cadeias gama alanina e gama glicina nas amostras que apresentaram Hb F aumentada. Em pH alcalino, foi possível identificar a cadeia globínica alterada em 68 (82%) amostras. Foram encontrados 35 (42%) mutantes de cadeia beta, 24 (29%) de cadeia alfa, quatro...

Dificuldades no diagnóstico laboratorial das hemoglobinopatias

“…Após a amplificação do alelo, a identificação do mutante poderá incluir análise de fragmentos de digestão por enzimas específicas, gerando resultados diferentes para homozigotos e heterozigotos para a hemoglobina em questão. 5,6 A PCR-AE -amplificação alelo-específica -consiste somente na amplificação dos alelos mutantes e normais, facilitando a análise e diminuindo custos, por não utilizar enzimas de restrição. 7 O conjunto de resultados laboratoriais, tanto das metodologias clássicas, quanto das moleculares, contribuem para o conhecimento das hemoglobinas no Brasil, elucidando interações e auxiliando na orientação genético-educacional…”

Association of Hemoglobin E-Saskatoon with Hemoglobin S: Report of the First Case Found in Brazil

“…In the literature there are accounts of an Hb variant with electrophoretic mobility very similar to that of Hb E [15,16,17,18]. It usually has fully normal hematological parameters and slow electrophoretic mobility, with a high prevalence in Southeast Asia.…”

Research Article Characterization of molecular hemoglobin c and beta thalassemia

“…The Brazilian population is characterized by having wide genetic heterogeneity, reflecting the polymorphism of hemoglobin (Chinelato-Fernandes and Bonini-Domingos, 2005;Alexandre and Marine, 2013). The hemoglobinopathies may reflect mutations affecting regulatory genes, causing an imbalance in the quantitative content of polypeptide chains, causing thalassemias, or even changes involving structural genes which cause the formation of Hb molecules with different characteristics also called HB variants (Ondei et al, 2005) (Manual do Ministério da Saúde de Brasília 2016).…”