Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce

Benedito, Vagner A.; Filho, Francisco de Assis Alves Mourão; Mendes, Beatriz Madalena Januzzi

doi:10.1590/s0103-90162000000100007

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“…16 Twenty replications were prepared for each culture and for each sampling week (7 -14 -21 -28 days). Each replication consisted of one Petri dish.…”

Section: Plant Materialsmentioning

confidence: 99%

Ultrasound-assisted extraction of Ca, K and Mg from in vitro citrus culture

Arruda¹,

Rodriguez²,

Arruda³

2003

J. Braz. Chem. Soc.

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Apresenta-se um procedimento para extração de Ca, K e Mg de amostras de cultivo in vitro de plantas, comparando-se culturas de calo com diferentes potenciais embriogênicos de Citrus sinensis e Citrus limonia, com o emprego de energia ultra-som. Foram investigados os parâmetros relacionados com a extração de metais, tais como tipo de amostragem do material, concentração do ácido e tempo de sonicação. Visando a comprovação da exatidão, o procedimento de extração ultra-sônica foi comparado com o de digestão ácida assistida por microondas, e não foram observadas diferenças estatísticas significativas em um nível de confiança de 95%. Com este procedimento de extração simples e preciso, foi possível estabelecer diferenças nas concentrações de Ca, K e Mg durante a formação/desenvolvimento dos embriões de Citrus, bem como entre as culturas (embriogênicas e não-embriogênicas). Finalmente, a extração ultra-sônica demonstrou-se uma excelente alternativa para menor manipulação das amostras e redução de custos operacionais.An ultrasound extraction procedure for Ca, K and Mg from in vitro plant cultures is proposed, comparing cultures of different embryogenic levels of Citrus sinensis and Citrus limonia, employing ultrasound energy. Parameters related to metals extraction, such as plant material sampling, acid concentration and sonication time were investigated. For accuracy check, the proposed ultrasound extraction procedure was compared with a microwave-assisted digestion procedure and no differences in the results were verified at 95% of the confidence level. With this simple and accurate extraction procedure, it was possible to determine differences in Ca, K and Mg concentrations during Citrus embryo formation/development and between cultures (embryogenic and non-embryogenic). Finally, the ultrasound extraction method demonstrated to be an excellent alternative for handless sampling and operational costs. Keywords: ultrasound extraction, FAAS, FAES, Ca, K and Mg determination IntroductionClassical sample preparation methods commonly used for biological studies are those based on dry or wet decomposition, 1,2 which, in general, require intensive sample handling and time/reagent consumption. In this context, the use of ultrasound can be an excellent alternative to minimize sample preparation [3][4][5] and to avoid solvent extraction, 6,7 because its energy facilitates and accelerates some analytical steps, permitting less time consumption and decreasing the cost per analysis. Besides these characteristics, accuracy, precision, and handless manipulation can be achieved when ultrasound-assisted extraction methods are used. 4 As an example, the application of ultrasound as an auxiliary energy source for solid sample treatment was made by Luque de Castro and Silva. 8 The authors emphasized different applications of ultrasound mainly related to sample treatment of agricultural, biological and environmental samples. Carvalho et al. 9 pointed out the sonochemical degradation that occurs inside extracted solutions when using the ...

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“…16 Twenty replications were prepared for each culture and for each sampling week (7 -14 -21 -28 days). Each replication consisted of one Petri dish.…”

Section: Plant Materialsmentioning

confidence: 99%

Ultrasound-assisted extraction of Ca, K and Mg from in vitro citrus culture

Arruda¹,

Rodriguez²,

Arruda³

2003

J. Braz. Chem. Soc.

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“…Diversos fatores estão envolvidos no processo de isolamento de protoplastos, como tipo e concentração de enzimas digestivas, o potencial osmótico da solução de isolamento e a estrutura física da parede das células dos calos embriogênicos em estudo (BENEDITO et al, 2000).…”

Section: Resultsunclassified

“…mL -1 , em 500 mg de calos embriogênicos. Tais resultados contrastam-se com aqueles apresentados por Benedito et al (2000), em que a solução enzimática de Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase, 1% macerase e 0,2% de pectoliase (denominada de solução enzimática 1 no presente trabalho) foi considerada a melhor para as cultivares de laranja-doce Baia Cabula, Orvalho de Mel, Rubi e Valência. Neste presente trabalho, a solução enzimática 1 foi a melhor apenas para a cultivar Westin (Figura 1).…”

Section: Resultsunclassified

Eficiência de isolamento e de plaqueamento de protoplastos de laranja-doce

2011

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O isolamento e plaqueamento de protoplastos são fatores fundamentais para o sucesso no cultivo in vitro deste tipo de explante visando a manipulações genéticas. A composição da solução enzimática no isolamento, a densidade de cultivo, bem como o próprio genótipo utilizado são variáveis importantes nestas etapas. Desta forma, o objetivo do trabalho foi avaliar a eficiência de isolamento de protoplastos em função de três soluções enzimáticas e a eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes composições de meio de cultura em cultivares de laranja-doce. As soluções enzimáticas avaliadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. celulase Onozuka RS 1%, macerase R-10 1% e pectoliase 0,2%; 2. celulase Onozuka RS 1%, macerase R-10 1% ; 3. celulase Onozuka R-10 4%, macerase R-10 1%. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado nas densidades de 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2x 10(5) e 3 x 10(5) protoplastos.mL-1, nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares 'Hamlin', 'Natal' e 'Pera', e a solução enzimática 1 foi a mais adequada para a laranja 'Westin'. Para a cultivar 'Lima-Verde', a solução enzimática 3 foi a mais eficiente. A eficiência final de plaqueamento, avaliada aos 90 dias de cultivo, foi superior nas densidades de 3 x 10(5) e 2 x 10(5) protoplastos.mL-1 para as cultivares 'Hamlin', 'Natal' e 'Lima-Verde', e nas densidades de 2 x 10(5) e 10(5) protoplastos.mL-1 para a laranja 'Westin'.

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“…A regeneração de plantas ocorreu por embriogênese somática em meio de cultura EME modificado pela adição de maltose (37 mM) (Benedito et al, 2000). Os embriões formados foram então transferidos para o meio 1500 (Grosser & Gmitter Junior, 1990).…”

Section: Methodsunclassified

Regeneração de plantas após fusão de protoplastos de tangelo 'Page' e toranja 'Lau Tau'

et al. 2007

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RESUMO -Buscou-se a hibridação somática entre tangelo 'Page' e toranja 'Lau Tau' visando à produção de porta-enxerto semelhante à laranja-azeda, por esta espécie ser considerada um provável híbrido entre C. reticulata e C. grandis. Após isolamento, fusão e cultivo de protoplastos, obtiveram-se brotações que foram enxertadas in vitro, em laranja 'Hamlin'. Dezessete plantas foram aclimatizadas em casa de vegetação. A análise de citometria de fluxo confirmou a constituição diplóide dessas plantas. Marcadores moleculares RAPD das plantas regeneradas apresentaram padrão de bandas similar ao de tangelo 'Page'. Entretanto, todas as plantas apresentaram conformação fenotípica diferente dos genitores. Termos para indexação: citros, cultura de tecidos, hibridação somática, porta-enxerto, melhoramento genético. PLANT REGENERATION AFTER PROTOPLAST FUSION OF 'PAGE' TANGELO AND 'LAU TAU' PUMMELOABSTRACT -This work aimed to produce somatic hybrid between 'Page' tangelo and 'Lau Tau' pummelo in an attempt to regenerate a similar rootstock to sour orange, because this species is considered a probable hybrid between C. reticulata and C. grandis. After protoplast isolation, fusion and culture regenerated shoots were in vitro grafted on 'Hamlin' sweet orange. Seventeen plants were acclimatized in a greenhouse. Citometric flow analyses revealed that all plants are diploid. RAPD molecular markers of regenerated plants had the same pattern as compared to 'Page' tangelo. However, all plants had phenotypic traits different from both genitors.

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Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce

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Ultrasound-assisted extraction of Ca, K and Mg from in vitro citrus culture

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