Meio semi-seletivo para isolamento de Xanthomonas campestris pv. viticola

Peixoto, Ana Rosa; Mariano, Rosa de Lima Ramos; Viana, Ivanise O.

doi:10.1590/s0103-84782006000400045

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“…Este meio de cultura apresentou boa eficácia, provavelmente por ter a composição do meio NYDAM (NYDA + ampicilina), comprovadamente semisseletivo para Xcv (PEIXOTO et al, 2006); foi adicionado do antibiótico rifampicina, que é utilizado para resgate do isolado mutante Xcv2…”

Section: Rifunclassified

Sobrevivência de Xanthomonas campestris pv. viticola em tecido infectado de videira

Silva¹,

Menezes

Souza³

et al. 2012

Rev. Bras. Frutic.

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RESUMO -Tecidos de plantas infectados constituem uma importante fonte de inóculo primário para fitobacterioses. O objetivo deste trabalho foi investigar a sobrevivência de Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv), agente do cancro bacteriano da videira, em tecidos infectados na superfície do solo e durante a compostagem de restos de poda. Mudas de videira 'Festival' foram inoculadas com mutante resistente à rifampicina Xcv2Rif e mantidas em casa de vegetação até apresentarem alta severidade da doença. No primeiro experimento, ramos fragmentados e folhas inteiras destas plantas foram acondicionados em bolsas de malha plástica e colocados na superfície de microparcelas. No segundo experimento, ramos e folhas fragmentados foram acondicionados em bolsas plásticas e depositados no interior de pilhas de compostagem de restos de poda de videira. A sobrevivência de Xcv2Rif em tecidos infectados foi monitorada a intervalos de 8 e 10 dias a partir do início do primeiro e segundo experimentos, respectivamente. No primeiro experimento, foi também avaliada a decomposição de tecidos, e no segundo, as curvas de temperatura das pilhas, conteúdo de fenóis e microbiota antagonista a Xcv2 Rif. O patógeno sobreviveu em altas populações até 80 dias em tecidos infectados na superfície do solo. A compostagem eliminou Xcv2Rif de restos culturais em 10 dias, devido às altas temperaturas, liberação de compostos fenólicos e antagonismo microbiano. Concluindo, em tecidos infectados de videira Xcv sobrevive na superfície do solo por, pelo menos, 80 dias mas é eliminada pela compostagem em 10 dias. Termos para Indexação: Cancro bacteriano da videira, restos de cultura, epidemiologia, Xanthomonas campestris pv. viticola, erradicação. SURVIVAL OF Xanthomonas campestris pv. viticola IN INFECTED TISSUES OF GRAPEVINEABSTRACT -Infected plant tissues are an important primary inoculum sources for plant bacterial diseases. This study investigated the survival of Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv), the agent of bacterial canker of grapevine in infected tissues on soil surface and during composting process of pruning residues. Grapevine plants cv. Festival were inoculated with a mutant resistant to rifampicin Xcv2 Rif and maintained under greenhouse conditions until presenting high disease severity. In the first experiment, fragmented shoots and entire leaves from these plants, were placed into mesh bags and located on the surface of microplots. In the second experiment fragmented shoots and leaves were also placed into mesh bags and located inside composting piles of grapevine pruning residues. The survival of Xcv2Rif in infected tissue was monitored at 8 and 10 days intervals from 1 and 2 experiment setting, respectively. In the experiment 1 tissue decomposition was also evaluated and in the experiment 2, pile temperature curves, phenolyc content, and antagonism against Xcv2Rif were analyzed. The pathogen survived in high populations for at least 80 days in grapevine-infected tissues on soil surface. The composting process eliminated Xcv2Rif ...

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Section: Rifunclassified

Sobrevivência de Xanthomonas campestris pv. viticola em tecido infectado de videira

Silva¹,

Menezes

Souza³

et al. 2012

Rev. Bras. Frutic.

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“…glycines no meio semiseletivo MXG (29) e na detecção de Xanthomonas axonopodis pv. vignicola em videira no meio CCM (17).…”

Section: Meio De Culturaunclassified

Detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho

Mamede

Tebaldi

2020

Summa phytopathol.

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RESUMO A cultura milho (Zea mays L.) está sujeita a ocorrência de várias doenças, entre elas a mancha branca, causada pela bactéria Pantoea ananatis. Recentemente a bactéria foi detectada em sementes de milho. Diante disso, este trabalho teve como objetivos: avaliar meios de cultura para detecção de P. ananatis, detectar a presença da bactéria em oito genótipos de sementes milho, identificar e caracterizar bioquímica e molecularmente os isolados bacterianos obtidos. Para avaliação dos meios de cultura, o isolado de P. ananatis foi cultivado em cinco meios de cultura (523, NA, TSA, PA10 e PA20) com ausência e presença dos fungicidas ciclohexamida e tiofanato metílico, com três repetições cada. A eficiência de cada meio de cultura foi determinada a partir do diâmetro das colônias e contagem do número de colônias em UFC mL-1. Para detecção da bactéria em sementes, oito genótipos de milho foram avaliados. Os extratos das sementes foram diluídos em série (10-1 a 10-2) e cultivados em três meios de cultura (523, NA e TSA) com três repetições para cada diluição. Os isolados obtidos foram caracterizados bioquímica, fisiologicamente e molecularmente. Os meios de cultura TSA e 523 com adição de ciclohexamida foram eficientes para a detecção de P. ananatis. A bactéria foi detectada em cinco genótipos de sementes de milho. O meio de cultura TSA com adição de ciclohexamida pode ser recomendado para a detecção de P. ananatis em sementes de milho.

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“…Xcv strains were previously identified by PCR using the Xcv1F/3R primers (Trindade et al 2007). All strains were preserved in sterile distilled water at room temperature and in 30% glycerol at -20 °C and grown in semi-selective NYDAM (Peixoto et al 2006) composed of 3 g of beef extract, 5 g of peptone, 10 g of glucose, 5 g of yeast extract, 18 g of agar, 0.1 g of ampicillin and distilled water to 1 liter, or in 523 medium (Kado and Heskett 1970) at 28 °C for 2-3 days. In all PCR assays, DNA or cell suspension from Xcv strain UnB 1188 (SISGEN A99F2F2) was used as a positive control.…”

Section: Bacterial Strainsmentioning

confidence: 99%

Detection of Xanthomonas citri pv. viticola on grapevine by real-time PCR and BIO-PCR using primers designed from pathogenicity and xanthomonadin gene sequences

et al. 2019

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Grapevine bacterial canker caused byXanthomonas citri pv. viticola (X. campestris pv. viticola) (Xcv), was detected in Brazil in 1998 and is currently regarded as a quarantine disease with limited distribution in the country. To improve sensitivity and speed in the detection of Xcv in asymptomatic grapevines, two pairs of primers were designed, targeting sequences of a pathogenicity gene (hrpB) and the xanthomonadin coding cluster. Both pairs were tested in conventional PCR (cPCR) and real-time PCR (qPCR) formats. Primers targeting the hrpB gene showed cross reactions with other Xanthomonas spp. but were effective for use in both cPCR and qPCR, whereas primers for the xanthomonadin gene were highly specific for Xcv but showed low efficiency in qPCR. Enrichment of plant extracts in semi-selective medium before qPCR allowed a significant increase in sensitivity when compared to total DNA extraction, making it possible to detect as low as 10 1 CFU ml -1 . Under natural infection conditions, symptomatic and asymptomatic grapevines were tested by qPCR with hrpB primers and cPCR with xanthomonadin primers. In both cases, plant extracts were enriched for 36-72h. Xcv was detected in all symptomatic samples by qPCR and the result was confirmed by cPCR. For the asymptomatic samples, Xcv was detected in 93.4% with qPCR and in 89.5% with cPCR. These two methods offer advantages in terms of sensitivity and specificity, and they could be useful in quarantine programs, certification of grapevine propagating material and detection of inoculum sources in alternative hosts, contributing to the prevention of pathogen spread to disease-free areas.Keywords Grapevine bacterial canker . Vitis vinifera . Xanthomonas campestris pv. viticola. PCR-based diagnosis . qPCR

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Meio semi-seletivo para isolamento de Xanthomonas campestris pv. viticola

Abstract: RESUMO

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Sobrevivência de Xanthomonas campestris pv. viticola em tecido infectado de videira

Sobrevivência de Xanthomonas campestris pv. viticola em tecido infectado de videira

Detecção de Pantoea ananatis em sementes de milho

Detection of Xanthomonas citri pv. viticola on grapevine by real-time PCR and BIO-PCR using primers designed from pathogenicity and xanthomonadin gene sequences

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