Padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva em amostras de tecido do sistema nervoso central de bovinos fixadas em formol e emblocadas em parafina

Abstract

Pesq. Vet. Bras. 28(12):627-632, dezembro 2008 RESUMO.-Para a padronização da técnica de imunohistoquímica para raiva foram utilizadas cinco amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0 mantido a 100°C por 15 minutos. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato e calor. A técnica de imuno-histoquímica demonstrou a presença do antígeno viral no citoplasma de neurônios na forma de agregados de grânulos ou de forma redonda ou oval, mostrando cor- One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6.0) boiling at 100°C during 15 minutes in bain-marie. Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer and heat. The immunohistochemistry technique demonstrated the presence of viral antigens in the cytoplasm of neurons, in form of aggregates or with round or oval shape. The antigens were found as single or multiples inclusion bodies in the neurons. Immunohistochemistry is a fast method that can be used in routine procedures in cases where rabies is suspected, especially when the brain is submitted to the laboratory as formalin-fixed fragments or when samples could not be immediately shipped. The technique is also useful for retrospective studies.INDEX TERMS: Diseases of cattle, infectious diseases, diseases of the central nervous system, rabies, immunohistochemistry standardization.

Doenças do sistema nervoso de bovinos no Mato Grosso do Sul: 1082 casos

“…A imuno-histoquímica (IHQ) foi realizada no LAP como meio de diagnóstico em 95 casos de raiva (Pedroso et al 2008), utilizando-se anticorpo policlonal (Chemicon #5199) e em 30 casos de encefalite por herpesvirus bovino (Meyer et al 2001) com anticorpo monoclonal (VRMD #L6G).…”

Doença do armazenamento lisossomal induzida pelo consumo de Sida carpinifolia em bovinos do Rio Grande do Sul

“…Os cortes foram revelados com diaminobenzidine (DAB) (DAKO) por 5 minutos ou até atingir coloração marrom e contracorados com hematoxilina de Harris. Por se tratar de doença com sinais clínicos nervosos, todos os casos foram submetidos à técnica de imunohistoquímica para raiva (Pedroso et al 2008) e encefalopatia espongiforme transmissível (EET).…”

Rabies outbreak in buffaloes in Rio Grande do Sul, Brazil

“…Conversely, IHC allows for the detection of viral antigens in formalin fixed tissues and is extremely specific for confirming the diagnosis. In addition, IHC has been used as an additional tool in the diagnosis of rabies in humans and animals, especially in cases involving nonsuppurative meningoencephalitis without Negri bodies, and when DFA is negative (PEDROSO et al, 2008;RISSI et al, 2008). Furthermore, the detection of the rabies viral antigen in nervous tissue showing autolysis has been reported (ARSLAN et al, 2004).…”