Otimização de método para determinação de flavonóis e flavonas em frutas por cromatografia líquida de alta eficiência utilizando delineamento estatístico e análise de superfície de resposta

Abstract

Recebido em 8/7/07; aceito em 7/3/08; publicado na web em 26/8/08 OPTIMIZATION OF A METHOD FOR DETERMINATION OF FLAVONOLS AND FLAVONES IN FRUITS BY HPLC USINGSTATISTICAL DESIGN AND RESPONSE SURFACE ANALYSIS. This work optimized the HPLC conditions for the simultaneous determination of luteolin, apigenin, myricetin, quercetin and kaempferol in aglycone form, as well defined the best conditions for hydrolysis/extraction of these flavonoids in fruits, using the statistical central composite design and response surface analysis. A reverse phase method was developed using a gradient of methanol/water acidified with 0.3% formic acid as mobile phase and a photodiode array detector. The samples were extracted with methanol/water (50:50 v/v) at 90 ºC. The optimum time and HCl concentration varied for the different fruits investigated, demonstrating the necessity of optimizing these conditions for each fruit analyzed. Good recovery (87.1 to 96.3%), repeatability and linearity were obtained.Keywords: flavonoids; HPLC analysis; statistical central composite design. INTRODUÇÃOUm aumento na ingestão de frutas e vegetais tem sido correlacionado com a redução do risco de doenças crônicas, como as doenças cardiovasculares e câncer. 1 A atividade antioxidante dos flavonóides, encontrados na maioria das frutas e vegetais, é considerada um dos fatores que contribuem para esta redução. 2 Os flavonóides constituem uma família de moléculas diversas que consistem de dois anéis aromáticos, que estão conectados por um anel pirano. Estes compostos podem ser agrupados em seis subgrupos principais: flavonas (p.e. apigenina, luteolina), flavonóis (p.e. quercetina, miricetina), catequinas ou flavanóis (p.e. epicatequina, galocatequina), flavanonas (p.e. naringenina, hesperitina), antocianinas (p.e. cianina, pelargonina) e isoflavonas (p.e. genisteina, daidzeina). Das principais classes, os flavonóis glicosídicos predominam em frutas e verduras. 3 A determinação quantitativa de flavonóides glicosídicos individuais é difícil porque não estão disponíveis para aquisição comercial padrões para a maioria destes compostos. Além disso, mais de 50 glicosídios diferentes para cada um dos flavonóides mais comuns já foram descritos. A hidrólise dos glicosídios para liberar as agliconas oferece um método mais prático para determinação dos flavonóides. 4 Dependendo do tipo de açúcar ligado ao flavonóide, muitos parâmetros podem influenciar na eficiência da hidrólise como a composição de solventes, tempo de extração, concentração do ácido empregado, temperatura de extração entre outros, podendo ocorrer degradação ou mesmo hidrólise incompleta do glicosídio. Hertog et al. 4 definiram em seu estudo o uso do ácido clorídrico para hidrólise dos flavonóides, bem como maior eficiência da extração dos flavonóides com solução aquosa a 50% de metanol. Para otimizar as condições de hidrólise e extração dos flavonóides o emprego de procedimento estatístico se faz necessário, pois leva em consideração as interações destes fatores. 5 A análise por superfície de resposta...

Winery by-products: Extraction optimization, phenolic composition and cytotoxic evaluation to act as a new source of scavenging of reactive oxygen species

“…where Y is the dependent variable (antioxidant activity), b values are the constant coefficients, X and Z are coded values to the independent variables ethanol proportion and temperature, respectively, b 1 X and b 2 Z are the linear terms and represent the main effects, b 11 X 2 and b 22 Z 2 are the quadratic terms, and b 12 XZ refers to two effects of factor interaction (Hoffmann-Ribani & Rodriguez-Amaya, 2008). The quality of fit of the polynomial models was evaluated regarding the coefficient of determination (R 2 ) and F-test.…”

Chemical Analysis and in Vitro Antiproliferative Potential of Eugenia uniflora L. (Myrtaceae)

“…Chromatographic analyses were performed using the method of Hoffmann-Ribani & Rodriguez-Amaya [28]. HEE was partitioned on a separating funnel with solvents of increasing polarity (hexane, chloroform, ethyl acetate, and nbutanol).…”

Atividade Antimicrobiana de Flavonoides: uma Revisão de Literatura

“…Quimicamente constituem-se como uma família de moléculas diversas que apresentam dois anéis aromáticos (A e B), que estão conectados por um anel pirano (C) (figura 1). Estes podem ser divididos em seis subgrupos: flavonas (apigenina), flavonóis (quercetina), catequinas (epicatequina), flavononas (hesperitina), antocianinas (cianina) e isoflavonas (genisteina) 27 . São sintetizados pela via metabólica do ácido chiquímico e ácido acético, a partir da fenilalanina.…”