Regeneração de plantas de laranja 'Pêra' via organogênese in vitro

Abstract

Resumo -O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo eficiente de regeneração de plantas in vitro, via organogênese em explante juvenil de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis L. Osbeck), para atender futuros trabalhos de transformação genética. Segmentos de epicótilo utilizados como explantes foram introduzidos em meio de cultura MT. A fim de maximizar a regeneração de plantas in vitro, foram realizados experimentos para avaliar as concentrações de BAP no meio de cultivo (0, 1, 2, 3 ou 4 mg L -1 ), tamanho (0,25, 0,5 ou 1 cm), polaridade (basal, medial e apical), posição (horizontal ou vertical), condições de luminosidade (fotoperíodo de 16 horas e escuro por 30 dias) e seccionamento nas extremidades dos explantes, bem como melhores condições para garantir plantas enraizadas (meio MT, MT/2, com ou sem auxina e microenxertia). A combinação de 3 mg L -1 de BAP com segmentos de 0,25 cm de comprimento foi eficiente na resposta organogenética. Segmentos apicais e mediais apresentaram melhores resultados do que os basais. O cultivo dos segmentos na posição horizontal, em fotoperíodo de 16 horas, foi mais eficiente do que na posição vertical. Não houve melhora na indução da organogênese in vitro, quando foram seccionadas as extremidades dos explantes. A microenxertia assegurou 100% de brotos enraizados.Termos para indexação: Citrus sinensis, cultura de tecidos, explante juvenil, benzilaminopurina, microenxertia. Regeneration of 'Pera' sweet orange plants through in vitro organogenesisAbstract -The objective of this work was to establish an efficient protocol for in vitro regeneration of plants through organogenesis of sweet orange 'Pera' (Citrus sinensis L. Osbeck) juvenile explants, in order to give support for future studies of genetic transformation. Epicotyl segments used as explants were introduced in MT culture media. To maximize the regeneration of in vitro plants, experiments were performed to evaluate different concentrations of BAP in the culture media (0, 1, 2, 3 or 4 mg L -1 ), size (0.25, 0.5 or 1 cm), polarity (basal, medium, and apical), position (horizontal or vertical), luminosity conditions (photoperiod of 16 hours, and darkness for 30 days), and incision of the segment ends. In addition, better conditions for obtaining rooted plants (culture media MT, MT/2, with and without auxin and micrografting) were studied. The combination of 3 mg L -1 BAP with segments of 0.25 cm length was efficient for the organogenetic response. Segment apices and mediums were more efficient comparing to the basal parts. Culturing the segments in the horizontal position, with a photoperiod of 16 hours, was more efficient than in the vertical position. There was no improvement in the induction of in vitro organogenesis, when the explant ends were incised. Micrografting assured 100% of rooted shoots.

Organogênese in vitro a partir de diferentes regiões do epicótilo de Citrus sp

“…A suplementação do meio de cultura com citocinina, principalmente 6-benzilaminopurina, é considerada essencial para o desenvolvimento da organogênese in vitro, em diferentes espécies (Beyl, 2000;Moreira-Dias et al, 2001;Silva et al, 2005b). Para o caso específico de citros, a organogênese in vitro tem sido obtida cultivando-se segmentos de epicótilo ou segmentos internodais em meios de cultura suplementados com 6-BAP (Almeida et al, 2002(Almeida et al, , 2003Moura et al, 2001;Silva et al, 2005aSilva et al, , 2005b ou com a combinação 6-BAP + ANA (Almeida et al, 2003;Bordón et al, 2000;Moreira-Dias et al, 2000.…”

“…Resultados semelhantes também foram verificados neste trabalho para laranja 'Natal', citrange 'Carrizo' e laranja-azeda, em que a região basal do epicótilo respondeu melhor à organogênese. Porém, alguns trabalhos indicaram quanto mais distante do nó cotiledonar o explante for coletado, maior a freqüência de desenvolvimento de gemas adventícias (Costa et al, 2004;Silva et al, 2005aSilva et al, , 2005b, conforme demonstrado para limão 'Volkameriano' neste trabalho.…”

“…A organogênese in vitro de citros tem sido estudada a fim de otimizar os meios de cultura utilizados (Almeida et al, 2002(Almeida et al, , 2003Bordón et al, 2000;Moreira-Dias et al, 2000Moura et al, 2001;Silva et al, 2005aSilva et al, , 2005b, as condições de incubação (Bordón et al, 2000;Costa et al, 2004;García-Luis et al, 1999;Moreira-Dias et al, 2000) e o tipo de explante (Almeida et al, 2003;Ghorbel et al, 1998;Moura et al, 2001). Com relação ao explante, sabe-se que a organogênese de citros é influenciada pelo uso de explantes coletados de tecido jovem (Almeida et al, 2002;Bordón et al, 2000;Costa et al, 2004;García-Luis et al, 1999;Moreira-Dias et al, 2000Silva et al, 2005aSilva et al, , 2005b) ou adulto (Almeida et al, 2003;Cervera et al, 1998), da região do epicótilo utilizada para coletar o explante (Costa et al, 2004;Moreira-Dias et al, 2001;Silva et al, 2005aSilva et al, , 2005b, da posição na incubação, vertical ou horizontal (Bordón et al, 2000;García-Luis et al, 1999;Moreira-Dias et al, 2000;Silva et al, 2005b), da polaridade (García-Luis et al, 1999) e do tipo de seccionamento (Moura et al, 2001;Silva et al, 2005a). Os resultados obtidos nestes estudos nem sempre são conclusivos, permitindo que sejam adaptados para outras cultivares.…”

Microenxertia e sua caracterização morfológica em Araucaria angustifolia

“…Em citrus, a microenxertia com brotações regeneradas in vitro apresenta 100% de pegamento (SILVA et al, 2005).…”

Organogênese in vitro e transformação genética de limão 'Volkameriano' (Citrus volkameriana) e laranja azeda (Citrus aurantium)

“…A cultura de tecidos é uma técnica baseada na totipotência celular, que consiste na capacidade da célula vegetal de desenvolver uma planta inteira, desde que submetida a condições que estimulem sua divisão e diferenciação (TORRES; CALDAS; BUSO, 1999 MOURA et al, 2001;COSTA et al, 2004;SILVA et al, 2005aSILVA et al, , 2005bSCHINOR et al, 2006;GARCÍA-LUIS et al, 2006) e segmentos internodal coletados de plantas jovens cultivadas em casa-de-vegetação (MOURA et al, 2001). Porém também existem relatos de obtenção de gemas adventícias a partir de segmento de raiz (BURGER; HACKETT,…”