Desenvolvimento e caracterização de método para a dosagem de cortisol livre urinário

Abstract

A dosagem de cortisol livre na urina de 24 horas é considerada por muitos como a dosagem mais útil na pesquisa da presença de síndrome de Cushing. Os resultados publicados são, no entanto, pouco comparáveis entre si em função de diferenças metodológicas importantes, relacionadas principalmente aos processos preparativos, sendo que a especificidade é diretamente proporcional à complexidade dos mesmos. Neste trabalho descrevemos a adaptação de um ensaio de rotina, desenvolvido originalmente para a medida de cortisol sérico, para a medida de cortisol urinário. O antisoro empregado, F-79-1, foi estudado quanto à especificidade em relação aos principais metabólitos urinários de cortisol, sendo os resultados obtidos comparáveis aos dos melhores antisoros descritos na literatura. O método preparativo utilizado faz uso de extração de alíquota de urina com diclorometano, seguida de cromatografia em coluna de Sep-Pak Diol. A recuperação média do processo foi de 63,3%; a sensibilidade do ensaio é da ordem de 1,6 mg/L e os coeficientes de variação intra e inter-ensaio da ordem de 7,2 e 15,6%, respectivamente. Os resultados obtidos em 40 amostras de indiví-duos normais foram de 21,9 a 74,1 mg/24hs (média de 47,8); a comparação com método semelhante de laboratório de referência internacional mostrou alta correlação (R= 0,9286, n= 74, p<0,001). Em quatro pacientes com doença de Cushing comprovada os valores foram significativamente elevados. O presente método, empregando antisoro próprio e processo preparativo simples, vai permitir uma aplicação mais ampla do teste e uma melhor avaliação de sua utilidade clínica. ABSTRACTThe measurement of 24-hours free urinary cortisol is considered by many authors as the best screening test for Cushing's syndrome. However, the published results are not comparable due to methodological differences between the various available techniques. These differences are related mainly to the preparative process employed, and in general there is a direct relation between the complexity of the process and the degree of specificity achieved. In this publication we describe the adaptation for free urinary cortisol measurement of a routine assay, developed originally for the measurement of serum cortisol. The specificity of the antiserum employed, F-79-1, was studied against the major urinary cortisol metabolites, and the results comparable to the best antisera described in the literature. The preparative method utilized includes dichloromethane extraction followed by a Sep-Pak Diol column chromatography. The mean recovery of the preparative process was 63.3%; the sensitivity of the assay is in the order of 1.6 mg/L and the intra and inter-assay CVs in the order of 7.2 and 15.6%, respectively. The results obtained in 40 samples from normal adults ranged betwen 21.9 and 74.1 mg/24hs (mean 47.8); the comparison with a similar method from an international refer-

Cortisol salivar na avaliação do eixo hipotálamo-hipofisário-adrenal em crianças saudáveis menores de 3 anos

“…This antiserum was synthesized at the Fleury laboratory by Prof. Dr. José Gilberto H. Vieira in 1975 20 and is compatible with the best antisera described in the literature.…”

Determination of cortisol and cortisone in human saliva by a liquid chromatography-tandem mass spectrometry method

“…One problem of free urinary or salivary cortisol measurements is the presence of a higher concentration of potentially interfering steroids. This is true for traditional RIA methods, even employing the best anti-cortisol antibodies, as was patent for free urinary cortisol measurement since the first described methods (13,14).…”

Dosagem de cortisol e cortisona livres urinários empregando cromatografia líquida associada a espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS)

“…Foram fornecidos frascos contendo 10g/L de ácido bórico e solicitado que a amostra fosse mantida em lugar fresco durante o perío-do de coleta. O método comparativo utilizado foi o baseado em extração e cromatografia, seguido por radioimunoensaio, conforme descrito anteriormente (12), e baseado no método preparativo simplificado descrito por Morineau (28). A metodologia estatística empregada para a comparação entre os resultados, e extrapolação de pontos de decisão, baseou-se no programa EP Evaluator, fornecido por David Rhoads Associates Inc., Kennett Square, PA, USA.…”

“…Há alguns anos publicamos trabalho relatando o desenvolvimento de um radioimunoensaio para cortisol livre urinário, baseado num anticorpo de boa qualidade, e com um processo preparativo relativamente simples (12). O método foi utilizado em nossa rotina durante mais de cinco anos, mostrando alta reprodutibilidade e robustez.…”