Rhodnius prolixus is the main Trypanosoma rangeli vector in several Latin-American countries and is susceptible to infection with KP1(+) strains; however, it presents an invasion-resistant response to KP1(-) strains. The present work has identified a trypanolytic protein against T. rangeli KP1(-) in the R. prolixus hemolymph which was fractioned with ammonium sulfate (following dialysis). The results revealed a protein component which did not depend on divalent cations for its biological function whilst keeping its trypanolytic activity at temperatures ranging from -20ºC to 37ºC, at 7.0 to 10.5 pH. The protein was partially purified by gel filtration chromatography and ionic exchange chromatography. The major component presented a molecular weight of around 79 kDa and an isoelectric point between 4.9 and 6.3 and may be directly related to hemolymph trypanolytic activity against T. rangeli KP1(-) populations.Key words: Rhodnius prolixus -Trypanosoma rangeli KP1(+) -Trypanosoma rangeli KP1(-) -trypanolytic factorvectorial ability -insect immunity Trypanosoma rangeli is a hemoflagellate which is apparently apathogenous for humans, presenting pathogenicity for the invertebrate host. T. rangeli is of great interest due to its presence in mixed infection with Trypanosoma cruzi in vertebrates and invertebrate hosts, thereby interfering with a clear diagnosis of Chagas' disease and the epidemiology of these parasites in different Latin-American countries .T. rangeli vectors become infected by ingesting blood from wild or domestic reservoirs in natural conditions. The parasite develops in the digestive tract and then invades the hemolymph where it is recognized by the vector's immune system; however, some strains may escape host defense mechanisms, reaching the salivary glands where they become infective forms or metacyclic trypomastigotes (D'Alessandro-Bacigalupo & Gore-Saravia 1992). Salivary gland invasion is a necessary step for transmission, being mediated by one or several ligandreceptor interactions (Basseri et al. 2002).Previous work has revealed two phylogenetically different groups in T. rangeli called T. rangeli KP1(-) and T. rangeli KP1(+), these being mainly transmitted by the 16 Rhodnius species described so far (Vallejo et al. 2002(Vallejo et al. , 2007. Specificity between the vector and the parasite strain which it transmits has been pointed out; each Rhodnius species seems to select the T. rangeli subpopulation to which it is susceptible in nature so that it can then be transmitted to the vertebrate host via insect bite . Nevertheless, a close association has been observed between T. rangeli KP1(+) and vectors from the prolixus group (which includes Rhodnius prolixus and Rhodnius neglectus) and between T. rangeli KP1(-) and vectors from the pallescens group (including Rhodnius pallescens, Rhodnius colombiensis and Rhodnius ecuadoriensis) , Urrea et al. 2005. Recent parasite-vector interaction studies have shown a trypanolytic factor in R. prolixus hemolymph impeding the development of T. rangeli KP1(...

Introducción. Trypanosoma rangeli es la segunda especie de tripanosoma que infecta al hombre en América Latina. Se ha observado variabilidad en las características biológicas, bioquímicas y moleculares en diferentes aislamientos de este parásito. Objetivo. Estudiar las características morfológicas y moleculares de cepas de T. rangeli aisladas de diferentes especies de Rhodnius e inoculadas en diferentes especies de vertebrados. Materiales y métodos. Se utilizaron 19 cepas de T. rangeli aisladas de R. prolixus, R. pallescens y R. colombiensis en Colombia, R. ecuadoriensis en Perú y R. pallescens en Panamá. Se evaluó el polimorfismo de los tripomastigotes sanguíneos en ratones ICR y se estudió el pleomorfismo de la cepa P53 de T. rangeli KP1(-) inoculada en ratón, marsupial y canino. Se efectuó análisis de ADN polimorfo amplificado aleatorio en 12 cepas aisladas de cuatro especies de Rhodnius. Resultados. Se observaron tres grupos discretos en la longitud total de los tripomastigotes sanguíneos y la cepa P53 presentó diferencias significativas en el tamaño de los tripomastigotes sanguíneos en ratón, marsupial y canino. El análisis de ADN polimorfo amplificado aleatorio mostró segregación de las cepas en dos ramas correspondientes a las cepas de T. rangeli KP1(+) y T. rangeli KP1(-). De otra parte todos las cepas de T. rangeli KP1(-) se agruparon de acuerdo con las especies de Rhodnius de las cuales fueron aisladas. Conclusión. Este es el primer estudio que revela una estrecha asociación entre cepas de T. rangeli y las especies de Rhodnius, confirmando que cada especie de Rhodnius transmite al hospedero vertebrado poblaciones del parásito con claras diferencias fenotípicas y genotípicas, lo cual soporta la evolución clonal de estas poblaciones.Palabras clave: Trypanosoma, Rhodnius, tripanosomiasis/epidemiología, técnica del ADN polimorfo amplificado aleatorio (RAPD), enfermedad de Chagas. Trypanosoma rangeli parasite-vector-vertebrate interactions and their relationship to the systematics and epidemiology of American trypanosomiasis

A new family of hybrid β,γ-peptidomimetics consisting of a repetitive unit formed by a chiral cyclobutane-containing trans-β-amino acid plus a Nα-functionalized trans-γ-amino-l-proline joined in alternation were synthesized and evaluated as cell penetrating peptides (CPP). They lack toxicity on the human tumoral cell line HeLa, with an almost negligible cell uptake. The dodecapeptide showed a substantial microbicidal activity on Leishmania parasites at 50 µM but with a modest intracellular accumulation. Their previously published γ,γ-homologues, with a cyclobutane γ-amino acid, showed a well-defined secondary structure with an average inter-guanidinium distance of 8–10 Å, a higher leishmanicidal activity as well as a significant intracellular accumulation. The presence of a very rigid cyclobutane β-amino acid in the peptide backbone precludes the acquisition of a defined conformation suitable for their cell uptake ability. Our results unveiled the preorganized charge-display as a relevant parameter, additional to the separation among the charged groups as previously described. The data herein reinforce the relevance of these descriptors in the design of CPPs with improved properties.

RESUMENEl descubrimiento y desarrollo de secuencias peptídicas (naturales o sintéticas), así como de peptidomiméticos que puedan penetrar en las células (CPPs, por sus siglas del inglés: Cell penetrating peptides), constituye un avance prometedor en la identificación de entidades capaces de promover la entrega no invasiva e íntegra de molécu-las pequeñas, ADN plasmídico, ARN de interferencia, proteínas, virus y nanopartículas, entre otras, al interior de la célula. Por lo general, estas secuencias peptídicas están compuestas de 5-30 aminoácidos y se pueden clasificar en catiónicos, anfipáticos e hidrofóbicos, teniendo en cuenta sus características estructurales. La presente revisión explora la clasificación y el estado del arte en general de esta temática, con especial énfasis en el tipo de unión entre el péptido con capacidad de atravesar la membrana celular (CPP) y la entidad a transportar.Palabras clave: Péptidos, Barrera hematoencefalica, transportadores moleculares, CPPs ABSTRACTThe discovery and development of natural, synthetic or peptidomimetic cell-penetrating peptides (CPPs) is a promising breakthrough to achieve non-invasive delivery of non-permeable biomolecules in the intracellular compartment. The CPPs are able to carry small molecules, plasmid DNA, interfering RNA, proteins, viruses, nanoparticles among others, across the cellular membrane, resulting in internalization of the intact cargos. In general, are sequence with 5-30 aminoacids, which are classified in cationics, amphipathics or hydrophobics, depending on its structural characteristics. The present review explores the classification, as well as the "state of the art" of this topic, focuses on the link between CPP and cargo.Keywords: Peptides, Molecular transportes, cell penetrating peptides, blood-brain barrie IntroducciónLas barreras biológicas son las interfaces generadas durante la evolución, que hicieron posible que los organismos abandonaran el agua y se establecieran en la tierra. Durante el proceso evolutivo, la necesidad de especificación promovió su diferenciación, con el fin de regular procesos como la homeostasis del agua, la entrada de nutrientes, el intercambio de gases o la excreción de compuestos tóxicos.1 Las barreras biológicas más estudiadas incluyen la piel, las membranas mucosas, la barrera hematoencefálica (BHE) y las barreras celulares. Estas últimas (por ejemplo, el núcleo o la mitocondria) constituyen las barreras de mayor importancia biológica si nos interesa potenciar el transporte de fármacos a través de ellas para mejorar la efectividad de los agentes terapéuticos.

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