Support structures for dermal regeneration are composed of biodegradable and bioresorbable polymers, animal skin or tendons, or are bacteria products. The use of such materials is controversial due to their low efficiency. An important area within tissue engineering is the application of multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) to reparative surgery. The combined use of biodegradable membranes with stem cell therapy may lead to promising results for patients undergoing unsuccessful conventional treatments. Thus, the aim of this study was to test the efficacy of using membranes composed of anionic collagen with or without the addition of hyaluronic acid (HA) as a substrate for adhesion and in vitro differentiation of bone marrow-derived canine MSCs. The benefit of basic fibroblast growth factor (bFGF) on the differentiation of cells in culture was also tested. MSCs were collected from dog bone marrow, isolated and grown on collagen scaffolds with or without HA. Cell viability, proliferation rate, and cellular toxicity were analyzed after 7 days. The cultured cells showed uniform growth and morphological characteristics of undifferentiated MSCs, which demonstrated that MSCs successfully adapted to the culture conditions established by collagen scaffolds with or without HA. This demonstrates that such scaffolds are promising for applications to tissue regeneration. bFGF significantly increased the proliferative rate of MSCs by 63% when compared to groups without the addition of the growth factor. However, the addition of bFGF becomes limiting, since it has an inhibitory effect at high concentrations in culture medium.
A Deus, por tudo o que me foi concebido até hoje, pela família maravilhosa e por todas as oportunidades oferecidas para mim durante meu percurso. Agradeço, também, pelos momentos difíceis e pelos problemas que pude enfrentar, pois são nas adversidades que amadurecemos, crescemos e evoluímos. À minha família, que apesar da distância, sempre esteve do meu lado, apoiando-me, torcendo por mim, sempre com muito amor. Agradeço imensamente aos meus queridos pais, irmãos e cunhada pelos conselhos profissionais, pelo apoio nas minhas decisões, pelo carinho nos momentos de ansiedade À minha orientadora, Drª. Patrícia Braga, pela oportunidade e pela confiança. À minha co-orientadora, Drª.Graciela Pignatari, pelas orientações durante todo o experimento. À Prof a. Drª.Maria Angélica Miglino, que me ofereceu a oportunidade para a realização do estágio curricular de graduação e para a realização deste mestrado. Às Doutorandas Fabi e Isa, por toda a gentileza na condução dos seus ensinamentos e por me ajudarem, sem mensuração de esforços. Agradeço, também, pelo repasse dos seus conhecimentos sobre reprogramação celular e cultura placentária, bem como tantos outros ensinamentos valiosos. Ao Doutorando Marcão, por me ensinar muito do que sabe sobre histologia, acompanhando de perto, com paciência. Agradeço imensamente pelos seus conselhos nos momentos difíceis em minha vida pessoal, e por ter sido compreensivo nos meus momentos de ansiedade. Tenho certeza de que ganhei um amigo que levarei para toda a vida. À Mestranda Carol, por me ensinar sobre cultura de saco vitelino e membrana amniótica; por me ajudar nos experimentos, estando sempre do meu lado, e, principalmente, agradeço pela amizade forte e sincera. Agradeço, também, pelos numerosos conselhos e momentos de alegria. Meu carinho e ternura serão eternos. Ao Mestrando João, pela ajuda com as fotos de diferenciação celular e por cuidar dos camundongos Nudes. Ao Mestrando Leandro, pela ajuda na histologia, pela sua alegria contagiante e suas paródias musicais divertidas. Às alunas de Iniciação Científica, em especial a Jeniffer e Thais, por me ajudarem intensamente na histologia e obtenção dos animais durante as campanhas de castração. Bem como às alunas Gabriele, Larissa e Ivy, pela ajuda na organização do laboratório. À minha querida amiga Graziela Menck, do laboratório LTIAM, pelo carinho e convívio familiar. Sou muito grata pela amizade forte e sincera que se iniciou durante o estágio curricular, e que, mesmo depois, entrando no mestrado em laboratórios diferentes, sempre torceu por mim e me acompanhou de perto na vida pessoal e profissional. Propiciou a mim momentos de alegria e de carinho. Tornou-se uma grande amiga! À Elaine Fernandes, que me apoiou muito no começo do mestrado e mesmo após a sua saída do departamento, a amizade e apoio continuaram fortes. Ao casal de amigos do departamento, Renata Nogueira e Luiz Nogueira, pela amizade e carinho, juntamente com a doce filha Larissa que sempre me encanta com seu sorriso e doçura.
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