RESUMOPara verificar a existência de reação cruzada entre leishmaniose visceral, erliquiose e babesiose, nos testes sorológicos utilizados em programas de controle da leishmaniose visceral humana, amostras de soro canino provenientes de áreas endêmicas e não endêmicas para essa enfermidade, foram testadas pela Reação de Imunofluorescência (RIFI) e Ensaio imunoenzimático (ELISA). Todos os soros provenientes de área endêmica foram positivos para Leishmania sp pelo ELISA e RIFI, 51% para Babesia canis e 43% para Ehrlichia canis pela RIFI. Pela RIFI, nenhum dos soros provenientes de área não endêmica foi positivo para Leishmania sp, sendo 67% positivos para B. canis e 78% para E. canis pelo mesmo teste. Quando testados pelo ELISA para Leishmania sp., quatro soros da área não endêmica foram positivos. Os cães foram localizados e nenhum sinal clínico, parasito ou anticorpo foi detectado em novos exames realizados ao longo de seis meses. Os resultados desse trabalho sugerem portanto, a presença de uma co-infecção entre os três parasitos citados nas áre-as endêmicas e não a reação cruzada entre eles, nos testes sorológicos de RIFI e ELISA descritos. To verify the presence of cross-reaction among leishmaniosis, ehrlichiosis and babesiosis in serological diagnostics used in human visceral leishmaniasis control programs, serum samples from leishmaniasis endemic and non-endemic areas were collected and tested by Indirect Fluorescent Antibody (IFAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). All serum samples from endemic areas were positive for Leishmania sp., by ELISA and IFAT, 51% positive for Babesia canis and 43% for Ehrlichia canis by IFAT. None of the serum samples from non-endemic areas were positive for Leishmania sp., by IFAT, but 67% were positive for B. canis and 78% for E. canis using the same test. When tested by ELISA for Leishmania sp., four samples from non-endemic area were positive. These dogs were then located and no clinical signs, parasites or antibody was detected in new tests for a six month period. Only one of these 4 samples was positive for B. canis by IFAT and ELISA and three for E. canis by IFAT. The results of the work suggest a co-infection in the endemic area and no serological cross-reaction among these parasites by IFAT and ELISA.

S U M M A R YNeospora caninum causes economical impact in cattle-raising farms since it is implicated as the major cause of bovine abortions. Although infection by the parasite has been widely described in mammals, the role of birds in its life-cycle is still obscure. Therefore, this work aimed to evaluate the infection by N. caninum in different chicken models. Experimental infections were conducted in 7-day-old chicks, laying hens and embryonated eggs, where samples were analysed for parasite burden, IgG antibodies and lesions promoted. Chickens demonstrated an asymptomatic infection, although with seroconversion and systemic replication of the parasite. In laying hens, no signs of vertical transmission were observed. However, embryonated eggs inoculated by the allantoic cavity route demonstrated susceptibility to infection, with mortality rates around 50% independent of the inoculum dose. Additionally, dogs became infected after ingestion of different amounts of inoculated eggs, producing either oocysts or specific IgG antibodies. The results herein presented demonstrate that chickens may be intermediate hosts of N. caninum and that embryonated eggs could be a useful model to study the parasite's biology.

An available enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was studied for the detection of anti-B. canis antibodies in the sera of dogs using, indirect fluorescent antibody test (IFAT) as a reference test. ELISA uses a soluble antigenic preparation of B. canis and the optimal dilutions of the antigen, serum and conjugate were determined by check board titration, using positive and negative reference serum. The soluble antigen preparation of B. canis merozoites was 10 µg.mL , with reference sera from positive and negative in a single dilution of 1:100, and conjugated to 1:4.000. A total of 246 serum samples were collected from dogs during the rabies vaccination campaign in Jaboticabal, São Paulo, Brazil and examined for the presence of antibodies against B. canis by ELISA and IFAT. Under these conditions, the average absorbance of negative serum was 0.129 ± 0.025, resulting in a cut-off value of 0.323 (ELISA level 3) and the average absorbance of positive reference serum was 2.156 ± 1.187. The serological positive samples tested for B. canis by ELISA and IFAT were 67.89% (n = 167) and 59.35% (n = 146), respectively. These results suggest that ELISA described may prove to be an effective serological test to diagnose canine babesiosis.Keywords: Babesia canis, ELISA, IFAT, dogs. ResumoO presente trabalho estudou um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto para a detecção de anticorpos anti-Babesia canis no soro de cães, tendo a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), como teste de referência O antígeno utilizado no ELISA do presente estudo consistiu em uma preparação antigênica solúvel de merozoítas B. canis e as diluições ótimas do antígeno, soros e conjugado foram determinadas por titulação em bloco, utilizando soros de referência positivos e negativos. A preparação antigênica solúvel de B. canis ótima foi de 10 µg.mL -1 , com soros de referência positivos e negativos em uma única diluição de 1:100, e conjugado a 1:4.000. Um total de 246 amostras séricas foram colhidas em cães, durante a campanha de vacinação anti-rábica em Jaboticabal, São Paulo, Brasil e a presença de anticorpos anti-B. canis foi avaliada pelo ELISA e RIFI. Nestas condições, a média de absorbância dos soros de referência negativos foi de 0,129 ± 0,025, resultando em um ponto de corte de 0,323 (Nível de ELISA 3) e a média da absorbância dos soros de referência positivos foi de 2,156 ± 1,187. As amostras com sorologia positiva para B. canis por ELISA e RIFI foram 67,89% (n = 167) e 59,35% (n = 146), respectivamente. Os resultados obtidos sugerem que o ELISA descrito revelou-se um teste sorológico eficaz no diagnóstico da babesiose canina.

Resumo: Bubalinos são susceptíveis à infecção por Neospora caninum e Toxoplasma gondii, contribuindo assim para a disseminação destes protozoários na natureza. A ocorrência de anticorpos foi investigada em soro sangüíneo de bubalinos, utilizando-se a técnica de imunofluorescência indireta (IFI). Foram avaliados os fatores raça e idade dos búfalos, e também pesquisada a presença de anticorpos contra os dois parasitos em cães e humanos de convívio estreito com os bubalinos. Amostras de soros foram colhidas de búfalos (n=411), cães (n=8) e humanos (n=14), oriundos de propriedades com características leiteiras e examinadas em laboratório. Dentre os soros de bubalinos testados, 56,0% foram reagentes (> 1:200) para N. caninum e 49,9% reagiram (> 1:64) contra T. gondii. Mostraram-se reagentes aos dois protozoários 33,9% dos búfalos. Dos soros de cães 25,0% reagiram ao N. caninum (> 1:50) e 62,5% contra o T. gondii (> 1:16). Nenhum soro humano mostrou-se reagente em níveis considerados positivos (> 100) pela literatura revisada. As fêmeas, entre 5 e 6 anos de idade, apresentaram maior percentual de sororreagentes a T. gondii. Os resultados obtidos permitem inferir que tanto o Neospora caninum quanto o Toxoplasma gondii encontramse bastante disseminados entre os rebanhos investigados e que aparentemente a raça e a idade das fêmeas não interferiram na freqüência de indivíduos sororreagentes ao N. caninum. Palavras-chave: Bubalus bubalis, Neospora caninum, Toxoplasma gondii, RIFI.Abstract: Water buffaloes (Bubalus bubalis), are capable of becoming infected with Neospora caninum and Toxoplasma gondii, contributing to disease dissemination. The incidence of these antibodies was assessed in sera of water buffaloes, using an immunofluorescent antibody technique (IFAT). Any possible influence of breed or age of the buffaloes was investigated, besides assessment of sera antibody titres of any dogs and humans that were in close contact with the tested animals. Serum samples were taken from water buffaloes (n=411), dogs (n=8) and humans (n=14), from buffalo dairy farms in the São Paulo State, and tested. Of the samples of buffalo sera tested, 56.0% were reactive (>1:200) to N. caninum and 49.9% were reactive (>1:64) to T. gondii. Of all, 33.9% of the buffaloes presented antibody titres for both protozoon parasites. Of the canine serum samples, 25.0% presented titres (>1:50) for N. caninum and 62.5% for T. gondii (>1:16). The human serum samples did not show detectable antibodies for N. caninum when using a >100 limit titre for positive findings. The obtained data allows the conclusion that the protozoan parasite N. caninum, as well as T. gondii, are widely disseminated in the water buffalo herds assessed and, apparently, the factors breed and age do not interfere with frequency of N. caninum positives among adult female buffaloes. When concerning T. gondii, female buffaloes of 5 to 6 years of age showed more frequent presence of specific antibodies. Key words: Neospora caninum, Bubalus bubalis, Toxoplasma gondii, Dog, Human, IFAT....