No abstract

A human supernumerary minichromosome (MC), previously identified as a derivative of chromosome 9, has been introduced into Chinese hamster ovary (CHO) cells by means of cell fusion. A hybrid clone containing the MC as the only free human chromosome was isolated. A selectable marker gene (neo) inserted into a yeast artificial chromosome (YAC) has been successfully targeted to the MC centromeric DNA via co-transfection with chromosome-9-specific alpha satellite DNA. In situ hybridization and Southern blotting experiments demonstrated that the intact neo gene was integrated into the MC centromeric DNA. Studies on the clonal distribution and on the stability of the MC either in the presence or in the absence of the selective agent have been carried out. The MC is susceptible to further manipulations and may thus represent a model for the construction of a large-capacity vector for somatic gene therapy.

We used fluorescence in situ hybridization to localize the human gene for cytokeratin 3 (KJRT3), a member of the type II subfamily of cytokeratins, within the human genome. The results show that KRT3 is located within chromosome region 12q12→q13. All human type II keratin genes mapped to date have been assigned to chromosome 12, where they are likely to be organized into one homotypic cluster.

Introduzione: Gli Enterobatteri produttori di ß-lattamasi a spettro esteso (ESßL) tipicamente causano infezioni nosocomiali. Gli enzimi di tipo CTX-M stanno assumendo un ruolo rilevante nel mondo; in Italia, sono stati isolati da pazienti ospedalizzati ed ambulatoriali. Scopo dello studio è determinare prevalenza e diffusione di ESßL di tipo CTX-M in E. coli isolati in tre Ospedali Geriatrici. Metodi: Nel periodo Marzo 2003-Maggio 2004, presso il Laboratorio di Microbiologia ASP P.Redaelli sono stati raccolti, da urine di pazienti con catetere vescicale, 77 isolati consecutivi, non replicati, di E. coli ESßL produttori (test CLSI). Le ß-lattamasi sono state studiate con IEF, attività enzimatica, metodi molecolari per evidenziare i geni blaTEM, blaSHV, blaCTX-M. Sono state effettuate coniugazione, estrazione alcalina dei plasmidi; genotipizzazione mediante PFGE. Risultati: 61/77 isolati di E. coli ESßL positivi esibivano più alti livelli di resistenza al cefotaxime che al ceftazidime. 52/61 isolati presentavano bande ß-lattamasiche multiple; di questi, 9/61 ceppi esprimevano ß-lattamasi di tipo CTX-M, 29/61 producevano enzimi di tipo CTX-M e TEM-1, 7/61 ceppi esprimevano enzimi di tipo CTX-M ed SHV; in 16 casi erano rilevabili geni blaCTX-M, blaTEM e blaSHV. Gli ESßL produttori erano multiresistenti, ma sensibili a piperacillina-tazobactam. La produzione di ß-lattamasi di tipo CTX-M era mediata prevalentemente da plasmidi coniugativi. La PFGE dei CTX-M produttori ha rivelato eterogeneità clonale con quattro linee maggiori (A-D) ed un cluster epidemico in ogni struttura. Plasmidi coniugativi di 50 e 55Kb sono stati evidenziati in ceppi di pulsotipo D e B rispettivamente. Conclusioni: Le strutture geriatriche rappresentano un reservoir di E.coli produttori di ESßL, in particolare di tipo CTX-M. La diffusione di geni blaCTX-M in E. coli è sia plasmide-che clone-mediata e, pertanto, destinata ad aumentare. Sono auspicabili misure di controllo efficaci, compreso il monitoraggio dei pazienti portatori di cateteri vescicali colonizzati/infetti da Enterobatteri produttori di ESßL.POSTER