Abstract:Haemophilus influenzae type b (Hib) bacteria that occur worldwide can cause serious infectious diseases that may lead to death. Vaccines made from Hib capsular polysaccharide (polyribosyl ribitol phosphate; 5-D-ribitol-(11)--D-ribose-3-phosphate; PRP) can prevent against these diseases. In PRP purification, the major contaminants (nucleic acids, proteins and endotoxins) are selectively removed and the classic Lowry method has been used in quality control for protein quantification, but has been shown to be inadequate for the level of this impurity found in PRP. This work aimed to select a suitable spectrophotometric method for the determination of residual protein levels in PRP samples. The results indicated the superiority of the Peterson method, with se siti it of . μg L ResumoA bactéria Haemophilus influenzae tipo b (Hib), que ocorre no mundo inteiro, é capaz de provocar doenças infecciosas severas que podem levar à morte. As vacinas feitas a partir do polissacarídeo capsular de Hib (poliribosil ribitol fosfato; 5-D-ribitol-(11)--D-ribose-3-fosfato; PRP) são usadas na prevenção de doenças meningocócicas. Na etapa de purificação do PRP os principais contaminantes (ácidos nucleicos, proteínas e endotoxinas) são removidos seletivamente e o clássico método Lowry é usado no controle da qualidade para quantificação de proteínas, mas demonstrou ser inadequado para o nível desta impureza no PRP. Este trabalho teve como objetivo sugerir um método espectrofotométrico mais apropriado para a determinação de proteínas à nível residual em amostras de PRP. Os resultados indicaram a superioridade do método Peterson, com sensibilidade de 0,01 µg mL -1 , limites de quantificação de 0,5 µg mL -1 , precisão de 5,0 % e acurácia de 97%. Palavras IntroduçãoA bactéria Haemophilus influenzae tipo b (Hib), que ocorre no mundo inteiro é capaz de provocar doenças infecciosas severas em crianças podendo levar à morte. Vacinas feitas a partir do polissacarídeo capsular de Hib (poliribosil ribitol fosfato; 5-D-ribitol-(11)--D-ribose-3-fosfato; PRP), podem prevenir contra doenças meningocócicas, principalmente em países com recursos limitados, nos quais a vacinação é a alternativa mais eficaz e acessível.1 No Brasil, após a primeira imunização contra meningite . Tem como vantagens a rapidez, o custo, a estabilidade e a compatibilidade com agentes redutores, mas apresenta resposta anômala para peptídeos de massa molar baixa (<67.000 uma). É indicado principalmente para amostras contendo resíduos de arginina, lisina e histidina. [14][15][16] O método de absorção no ultravioleta (UV) é rápido e não destrutivo, no entanto a Lemos, I. A. et al. 2628Rev. Virtual Quim. |Vol 9| |No. 6| |2625-2641| baixa especificidade é sua principal desvantagem, pois diversas outras substâncias absorvem no UV. Não obstante, é menos sensível que os métodos Lowry, Smith e Bradford. 10,16 O método Biureto tem sido utilizado desde 1915, é considerado rápido e de baixo custo.14 Devido à sua simplicidade e exatidão é um dos mais empregados na determi...
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