The causative agent of bovine tuberculosis (BTB) is Mycobacterium bovis, a bacterium belonging to the M. tuberculosis complex (MTC). The definitive diagnosis is achieved through isolation and identification of M. bovis from clinical samples, using a combination of traditional culture and biochemical methods, which is considered the "gold standard". This procedure is cumbersome and time-consuming. We evaluated a PCR assay for the direct detection of MTC DNA in milk of positive skin test cows, using primers that were previously tested and proven reliable to target the IS6110 element. Milk previously seeded with M. bovis was used as the starting material, for standardization of the technique. The procedure involved extracting the DNA by enzymatic lysis (proteinase K and lysozyme), phenol, chloroform, isoamyl alcohol, followed by ethanol precipitation and PCR. The PCR assay allowed us to detect BTB in artificially contaminated milk, with a detection limit of 100 CFU/mL, and was also able to detect the bacillus in 50% (75/150) of the milk samples tested. This procedure could be used to assist the in vivo diagnosis of BTB, complementing sorological or microbiological tests, becoming an alternative option for epidemiological studies of BTB transmission and preventing contaminated milk from entering the food supply.Keywords: Bovine tuberculosis. Molecular biology. Mycobacterium tuberculosis complex. Milk. ResumoO agente causador da tuberculose bovina (BTB) é o Mycobacterium bovis, uma bactéria pertencente ao complexo M. tuberculosis (CMT). O diagnóstico definitivo é realizado através do isolamento e identificação de M. bovis em amostras clínicas, utilizando uma combinação de cultura bacteriológica e métodos bioquímicos, que são considerados como "padrão de ouro". Entretanto, esses procedimentos são trabalhosos e demorados. No presente estudo, foi avaliado um ensaio de PCR para a detecção direta de DNA de CMT em leite de vacas positivas ao teste cutâneo, utilizando primers previamente testados e comprovadamente confiáveis, para amplificação da região de interesse IS6110. Leite previamente contaminado com M. bovis foi utilizado como material de partida para a padronização da técnica. O procedimento envolveu a extração do DNA por lise enzimática (proteinase K e lisozima), fenol, clorofórmio, álcool isoamílico, seguido de precipitação com etanol e PCR. O ensaio de PCR detectou BTB em leite artificialmente contaminado, com um limite de detecção de 100 UFC/mL, e também foi capaz de detectar o bacilo em 50% (75/150) das amostras de leite testadas. A técnica de PCR pode ser utilizada para auxiliar o diagnóstico in vivo da BTB, além de complementar os testes sorológicos ou microbiológicos, tornando-se uma alternativa para estudos epidemiológicos da transmissão de BTB, prevenindo que o leite contaminado entre na cadeia de alimentos.Palavras-chave: Tuberculose bovina. Biologia molecular. Complexo Mycobacterium tuberculosis. Leite.
RESUMOA criação de frangos alternativos preconiza o bem estar das aves sem o uso de antibióticos, coccidiostásticos, promotores de crescimento e ração de origem animal. No entanto, devido à ausência de inibidores exógenos, bactérias patogênicas podem estar se disseminando sem restrição na granja, sendo levadas ao abatedouro, contaminando não só o ambiente de abate, mas também o produto destinado ao consumidor final. Uma destas bactérias, Listeria monocytogenes é um microrganismo ubíquo, responsável pela listeriose, doença zoonótica grave que leva a aborto/natimortos, neuropatias, gastroenterites. É portanto, de fundamental importância que conheçamos a incidência desta bactéria da recepção das aves no abatedouro até o acondicionamento do produto final, para que possamos identificar com precisão os principais focos de contaminação. Assim, foram colhidas 230 amostras sendo estas, em ambientes, equipamentos, utensílios e carcaças
RESUMOO pacu (Piaractus mesopotamicus) é uma espécie nativa que apresenta crescimento rápido, boa aceitação sensorial e é considerado um símbolo da culinária de Mato Grosso, sendo amplamente comercializado fresco, congelado e salgado-seco. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições higiênico-sanitárias do pacu salgado-seco comercializado em Cuiabá-MT. Para tanto, 30 amostras foram adquiridas nos meses de setembro e novembro de 2017, compreendendo período de seca e chuva respectivamente. As análises realizadas foram: coliformes totais e termotolerantes, estafilococos coagulase positiva, Salmonella spp., bactérias halofílicas, bactérias heterotróficas aeróbias mesófilas, fungos filamentosos e leveduras, e pesquisa de parasitos. Houve diferença significativa (p<0,05) entre o período de seca e chuva para as contagens de coliformes totais (CT) e Estafilococos coagulase positiva (ES). As contagens médias encontradas para CT foram de 2,51 e 2,99 log UFC/g e para ES 3,71 e 4,55 log UFC/g para o período de seca e chuva respectivamente. Em 100% das amostras não foi observado crescimento de coliformes termotolerantes. Quanto as bactérias halofílicas, mesófilas, fungos filamentosos e leveduras, não houve diferença (p>0,05) entre o período de seca e chuva e as médias das contagens foram de 4,86, 5,34 e 4,78 log UFC/g respectivamente. Em nenhuma amostra avaliada foi detectada presenças de Salmonella spp. e parasitos. Com base nos resultados obtidos pode-se afirmar que o produto está improprio para o consumo, visto que as contagens de Estafilococos coagulase positiva excedem o preconizado pela RDC nº 12, legislação vigente no período de realização do trabalho em questão. No entanto, de acordo com a legislação atual, Instrução Normativa n. 60, de 23 de dezembro de 2019, os produtos seriam considerados aptos ao consumo, uma vez que, a mesma exclui a análise de Estafilococos coagulase positiva em produtos salgado seco.
The objective of this study was to evaluate the quality of native fresh fish sold in the main supermarket chains in the city of Cuiabá, Mato Grosso. Five commercial establishments were sampled by collecting six fish from each, totaling 30 fish, which were evaluated for their sensory, physicochemical, and microbiological properties. The temperature of the samples at the commercial establishment varied between 0.7°C and 7.9°C, reaching inadequate storage values. Sensorially, intermediate quality characteristics were observed. The physicochemical parameters were expressed according to the Brazilian legislation, with pH values ranging from 6.17 to 6.43 and total volatile basic nitrogen values ranging from 5.85 to 14.62 mgN∙100g−1. However, there were counts of up to 1.7 × 107 CFU∙mL−1 for the coagulase-positive Staphylococci, and >1.1 × 103 NPM∙mL−1 for coliforms at 45°C, which are both higher than the limits tolerated by the current Brazilian legislation and literature. It was concluded that the physicochemical, sensory, and microbiological analyses presented contradictory results, because of the presence of pathogenic microorganisms. Thus, the guarantee of the quality and safety of fish should be the responsibility of commercial establishments, as the consumer does not have adequate tools for this at the time of purchase.
Modo de acesso: World Wide Web Inclui bibliografia 1. Tecnologia de Alimentos 2. Alimentos 3. Nutrição I. Título CDD-664.005 O conteúdo dos artigos e seus dados em sua forma correção e confiabilidade são de responsabilidade exclusiva dos seus respectivos autores.
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