O total aproveitamento de embriões PIV ainda depende de uma metodologia eficiente de criopreservação. Este estudo avaliou a taxa de eclosão de embriões bovinos PIV, vitrificados em OPS usando três diferentes soluções crioprotetoras (Experimento 1) e o emprego de nitrogênio normal (-196°C) ou super-resfriado (-210°C) (Experimento 2). No primeiro experimento (12 repetições) 576 blastocistos expandidos (Bx) PIV foram aleatoriamente alocados em 4 grupos: G1 (20% EG + 20% DMSO), G2 (25% EG + 25% GLI), G3 (20% EG + 20% PRO) e G4 (controle não vitrificado). Após 72 horas de cultivo in vitro, a taxa de eclosão do grupo controle (84,0%) foi superior às observadas nos grupos vitrificados (P<0,05). Não houve diferença na eclosão do G1 (53,5%) e G3 (52,8%), que foram superiores (P<0,05) ao G2 (38,9%). No segundo experimento (5 repetições), 244 Bx foram aleatoriamente expostos às soluções EG+DMSO (G1 e G2) ou EG+PRO (G3 e G4), para avaliar o emprego de nitrogênio líquido super-resfriado pela submissão ao vácuo (-210°C). Não houve diferença (P>0,05) nas taxas de eclosão de embriões vitrificados com nitrogênio super-resfriado (G2=50,2% e G4=54,0%) ou nitrogênio normal (G1=50,1% e G3=56,0%), independente da solução crioprotetora empregada. Conclui-se que as soluções compostas por EG+DMSO e EG+PRO possibilitam taxas de eclosão similares e são mais eficientes que a solução EG+GLI. O emprego do nitrogênio super-resfriado não aumenta a viabilidade pós-vitrificação de blastocistos bovinos PIV.
RESUMO -Diferentes metodologias de desnudamento parcial de oócitos bovinos maturados foram avaliadas na produção in vitro de embriões e na vitrificação, em três experimentos. No primeiro avaliou-se o efeito do desnudamento parcial realizado por sucessivas pipetagens. No segundo, comparou-se o desnudamento através de sucessivas pipetagens, com o realizado pela enzima hialuronidase e no terceiro, avaliou-se a influência das duas metodologias na vitrificação de oócitos. Os oócitos foram submetidos aos tratamentos após 22 horas de maturação em meio TCM 199. Para a vitrificação, foram expostos por 30 segundos a uma solução de equilíbrio e 20 segundos a uma solução de vitrificação (20%EG + 20% Dimitilsufoxido (DMSO) + 0,3MSAC), envasados em palhetas abertas e estiradas (OPS) e mergulhados em N 2 líquido. O reaquecimento foi realizado com exposição a concentrações decrescentes de sacarose. Os oócitos de todos os tratamentos foram submetidos a duas horas adicionais de maturação, seguida da fecundação e os possíveis zigotos cultivados em meio SOFaaci. No experimento I foi observado um decréscimo de 28,7% para 20,5% na taxa de blastocistos com o emprego do desnudamento (P<0,05). Os métodos de desnudamento (sucessivas pipetagens ou enzima hialuronidase) proporcionaram semelhante taxa de blastocistos após cultivo (17,7% e 21,7% -Experimento II), bem como após a vitrificação (6,4% e 8,9% -Experimento III). Todavia, a hialuronidase determinou um desnudamento parcial mais homogêneo. Conclui-se que a hialuronidase pode substituir as sucessivas pipetagens no desnudamento parcial de oócitos, com idêntica viabilidade e maior praticidade. Palavras-chave:Oócitos; Bovino; Desnudamento; Vitrificação, Células cumulus.ABSTRACT -Different methods of partial denudation of maturated bovine oocytes were evaluated for in vitro embryo production and vitrification procedures, in three experiments. First the effect of partial denudation by successive pipetting was evaluated. In the second experiment, the denudation by pipetting was compared with the use of hyaluronidase, and finally, the effect of both methods was evaluated in regard to the vitrification of oocytes. Oocytes were submitted to treatments after 22 hours of maturation in TCM 199 medium. For the vitrification, they were firstly exposed for 30 seconds to an equilibrium solution and for 20 seconds to a vitrification solution (20% EG + 20% DMSO + 0.3M SUC), loaded in open pulled straws (OPS) and plunged into liquid nitrogen. The rewarming of the oocytes suspensions was carried out by plunged them in decreasing sucrose concentrations. Oocytes of all treatments were submitted to an additional 2 hours maturation period, followed by fertilization. Presumptive zygotes were cultured in SOFaaci medium. In the first experiment the denudation resulted in a decreased blastocyst rate (28.7% to 20.5% -P<0.05). Both denudation methods (pipetting or hyaluronidase) provided similar blastocyst rate after culture (17.7% and 21.7% -Experiment II), as well as after vitrification (6.4% and 8.9% -Experimen...
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