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Knowledge of the fish species in river basins is among the minimum requirements for the management of water and fish resources. Therefore, the aim of this study was to update the fish species composition of the Piquiri River basin, upper Paraná River basin. Data were gathered from recent information published in specialized literature and records for ichthyology collections. This update reports the occurrence of 152 fish species distributed in 8 orders, 31 families, and 89 genera. Non-native species accounted for 20% of all species, and the construction of the Itaipu Power Plant and its fish ladder were the main vectors of introduction. Three percent of the species were endangered, and 11% were classified as migratory. The Piquiri River basin harbors a large number of species, some of which are rare, endangered, migratory, endemic, and even unknown by science. Because of this, maintaining the integrity of this river basin will support the persistence of regional biodiversity. Keywords: Ichthyofaunal survey, species knowledge, preservation, upper Paraná River basin.Atualização da ictiofauna da bacia do rio Piquiri, Paraná, Brasil: uma área prioritária para conservaçãoResumo: O conhecimento das espécies de peixes existentes em uma bacia hidrográfica é condição mínima necessária para a implantação de qualquer medida de manejo dos recursos hídricos e pesqueiros. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi realizar uma atualização da composição das espécies de peixes da bacia do rio Piquiri, sistema do alto rio Paraná, proveniente de recentes informações contidas em estudos divulgados na literatura especializada e registros de espécies depositadas em coleções ictiológicas. A atualização do levantamento ictiofaunístico da bacia do rio Piquiri revelou a ocorrência de 152 espécies, as quais foram distribuídas em oito ordens, 31 famílias e 89 gêneros. Vinte por cento das espécies foram consideradas não nativas. O principal vetor de introdução foi a construção da barragem de Itaipu e seu sistema de transposição. Três por cento das espécies apresentaram alguma ameaça de extinção e 11% foram classificadas como migradoras. A bacia do rio Piquiri comporta grande número de espécies, algumas delas raras, ameaçadas de extinção, migradoras, endêmicas e até mesmo desconhecidas pela ciência. Dessa forma, a manutenção da integridade da bacia promoverá a persistência da biodiversidade regional. Palavras-chave:Levantamento ictiofaunístico, conhecimento das espécies, preservação, bacia do alto rio Paraná.