Cottonseed cake biomass, which is a residue of oil extraction, is potentially appropriate for use as animal feed, given the high mineral, fibre and protein content. The presence of free gossypol, however, a toxic pigment in the glands of the cotton plant, limits use of this biomass for monogastric livestock. A promising method to detoxify cottonseed cake relies on fermentation by fungi, which can eliminate up to 100% of gossypol. In order to quantify trace levels of free gossypol in different cotton materials, including cottonseed cake treated with macrofungi, a simple and rapid chromatographic detection method was developed and validated. Under optimized conditions, extraction was performed using 70% acetone. The extract was then analysed by Ultra High-Performance Liquid Chromatography (UHPLC), with gradient elution on a C18 reverse phase column KINETEX® (100 x 2.10 mm, 2.6 μm). Methanol-0.1% TFA aqueous solution was employed as mobile phase and PDA detection conducted at 254 nm. The optimized method was validated by analysis of specificity, linearity and range, limit of detection, limit of quantification, precision and accuracy. Detection and quantification limits were observed at 0.2 and 0.5 μg/mL, respectively. With good reproducibility, with precision (RSD)<10% and recovery greater than 94%, the developed assay was appropriate for quantification of low quantities of free gossypol. The validated method was successfully applied to determine trace levels of free gossypol cottonseed treated with a macrofungus.
AGRADECIMENTOSAgradeço a Deus por me direcionar cada dia durante essa fase da minha vida.Ao meu orientador prof. Dr. Helson Mario, pelo acolhimento, ensinamentos, paciência e por ter acreditado em meu potencial.Ao Dr. Fábio Bueno, pela convivência, pelas incontáveis orientações, ensinamentos, críticas necessárias. Obrigado por me apresentar um mundo novo da Microbiologia Agrícola! Aos Drs. Euan Kevin James (The James Hutton Institute) e Valter Antônio Baura (UFPR) pelas valiosas contribuições nos trabalhos de microscopia e sequenciamento.Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pelo apoio financeiro ao projeto.A CAPES -Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior pelo auxílio financeiro. A Universidade de Brasília e ao Programa de Pós Graduação em Biologia Microbiana.A Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária -Embrapa Cerrados, assim como, a empresa Mineradora Anglo American do Brasil, por toda logística de realização dos experimentos. Em especial aos laboratórios de Microbiologia de Solos, Fitopatologia e Biologia Molecular por todo apoio.A todos os colegas do laboratório de Microbiologia de Solos da Embrapa, em especial aos técnicos Lucas e Clodoaldo, por todo apoio e convivência diária e a Dra. Iêda pelo acolhimento e preocupação.Aos IC´S do laboratório e em especial Carlos e Vera por todo o apoio na realização dos trabalhos.A todos os Colegas de Pós-graduação e em especial a Lucas, Geysiane, Érica, Marcos, Cataherine e Flávia. Meus amigos e incentivadores, em especial Félix Siqueira, meus familiares obrigado pelas orações e toda torcida... A cada um que fez parte dessa história... Meu muito Obrigado! vi RESUMOSolos ultramáficos são caracterizados por apresentaram baixa disponibilidade de nutrientes e altos teores de metais pesados, incluindo o níquel. As leguminosas, como Mimosa spp., estão entre os vegetais que ocorrem naturalmente em áreas com esse tipo de solo. Para fixarem nitrogênio essas plantas se associam simbioticamente com bactérias diazotróficas, incluindo as beta-proteobactérias. O objetivo desse estudo foi avaliar a ocorrência, caracterizar e identificar bactérias diazotróficas noduladoras em simbiose com plantas do gênero Mimosa no maciço ultramáfico de Barro Alto-Goiás. Para tal, foram coletadas amostras de nódulos de Mimosa sommians e Mimosa clausenii, dos quais foi feito o isolamento das bactérias presentes nos nódulos em meio YMA. Foram obtidos setenta e oito isolados, caracterizados por meio de análises morfológicas, moleculares e bioquímicas. O sequenciamento do gene 16S RNAr mostrou que 54 isolados eram pertencentes ao gênero Burkholderia e seis a Pseudomonas. Não foi possível obter as sequências completas desse gene para 18 isolados. Somente nove isolados, incluindo as seis Pseudomonas, foram capazes de solubilizar fosfato em meio com fosfato de cálcio. Não houve solubilização em meio com fosfato de alumínio por nenhum dos isolados Os isolados não apresentaram tolerância ao Ni. Trinta e oito isolados foram capazes de produzir sideróforos ...
were characterized for their nodulation capacity on M. pudica and common bean, and their tolerance to Ni in culture medium. Bacteria were also partially identified by their 16S rRNA gene sequences. In addition, recA, gyrB, nodC and nifH genes from five representative isolates were sequenced for phylogenetic studies. Results In situ detection indicated the exclusive presence of Paraburkholderia sp. within the nodules. This identification was confirmed for most of the isolates by the analysis of their 16S rRNA gene sequences. All isolates identified as Paraburkholderia sp. were able to effectively nodulate M. pudica, but those tested in common bean produced ineffective
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