Phosphotyrosine-containing proteins in Dictyostelium discoideum were detected by immunoblot analysis and immunoprecipitation using a monoclonal anti-phosphotyrosine antibody. The iodinated antibody recognized on bots a cluster of 205-220 kDa polypeptides and bands of 107 and 60 kDa. The 107 and 60 kDa polypeptides and, in addition, a 82 kDa one became phosphorylated on tyrosine when the immunoprecipitate was incubated with [Y-~~P]ATP. In preparations from differentiating cells the intensity of the label was increased in the 60 kDa band and decreased in the 107 and 205-220 kDa bands.
In friiheren Mitteilungen dieser Reihe haben mir3) uber Umwandlungsprodukte der zweifach ungesiittigten tetracyclischen Elemiharzsauren C,,H,,O, berichtet und dabei verschiedentlich auf experimentelles Material hingewiesen, wonach sich eine auff allende Parallele im chernischen Verhalten dieser Triterpensiiuren einerseits, und der gleichfalls doppelt ungesattigten tetracyclischen Triterpenalkohole C,,H,,O Lanosterin4) und Kryptosterin5) andersejts ergibt. Zur genaueren Verfolgung dieser Zusammenhange hatten wir die Bearbeitung der beiden Alkohole aufgenommen. Ferner haben vor kurzer Zeit Wieland ~m d Belzertde), sowie Wielalzd und Joost7) die Resultate ihrer Arbeiten uber Lanosterin und Hryptosterin veroffentlicht, die teilweise von den von uns erhaltenen Ergebnissen abweichen, so dass wir zu einer vergleichenden Erorterung des bearbeiteten Gebietes veranlass t sind.Die Reindarstellung des Lanosterins aus dem Wollfett der Schafe bietet grosse Hindernisse, obwohl die in der Literstur enthaltenden Arbeitsvorschriftens) diese Operationallerdings in Unkenntnis der wirklich vorliegenden, weiter unten geschilderten Schwierigkeitenals eine relativ einfsche Aufgabe hinstellen. Fur unsere Versuche stellten wir uns einen Acetonextrakt aus Clem Cnrerseifbaren des Wollfettes her. Die darin enthaltenen Fettalkohole lassen sich mit Hilfe der chromatographischen Trennungsmethode Tollstiindiger entfernen als durch Auskochen mit Benzing), wonach das auf diese Weise vorgereinigte Alkoholgemisch durch oftmaliges Auskochen mit Netha-no1 leicht von Cholesterin befreit werden kannlO). Gnsere zahlreichen I) 86. Mitt. Helv. 27, 183 (1944): 2) Vgl. A. C. Illuhr, Vber die triterpenartigen Bestandteile des Wollfettes, Diss.
In the presence of NADH- reductases (dihydrolipoamide: NAD oxidoreductase E. C.l.8.1.4 from pig heart or from Clostridium kluyveri; frequently also addressed as “diaphorases”) and NADH lucigenin strongly increases ethylene production from a-ketomethylthiobutyrate (KMB) as an indicator for strong oxidants of the OH-radical type. These reactions are further stimulated in the presence of Fe3+ ions. With these NADH- “diaphorases”, the structurally similar poison, paraquat, in the absence or presence of Fe3+ has no effect. With ferredoxin-NADP reductase (E. C.1.18.1.2.), however, paraquat reacts quasi identical to lucigenin. Superoxide dismutase, catalase, free radical- or OH - scavengers such as mannitol, propylgallate, DABCO, and desferal inhibit the reaction whereas EDTA (in the presence or absence of added Fe3+) is stimulatory. From these data we conclude that the superoxide - indicator LUC is redox-active after unspecific coupling to several almost ubiquitory NAD(P)H- reductases catalyzing monovalent oxygen reduction. Lucigenin thus should no longer be used as a “specific” superoxide indicator. This report is in agreement with very recent results by Liochev and Fridovich (Arch. Biochem. Biophys. 337, 115 [1997]) and Vasquez-Vivar et al. (FEBS Lett. 403, 127 (1997).
Ktteilungl)).Beim Versuch, das Oxyd des trans-Dehydro-androsteron-acetats voni Smp. 222-223O durch Hydrierung mh Platin in Eisessig in das Mono-acetat des Androstendiol-oxyds uberzufaren, machten wir die Beobachtung, dass die Hydrierung erst nach Aufnahme von 2 No1 Wasserstoff zum Stillstand kam. A n Stelle des gesuchten Oxydes entstand in guter Ausbeute ein um zwei Wasserstoffatome reicheres Produkt, dessen Konstitution als die eines 3p-Acetoxy-5, l'i-dioxyandrostans sichergestellt werden konnte2). Diese Beobachtung veranlasste uns, die Hydrierung der beiden isomeren Osyde des trans-Dehydro-androsteron-acetats etwas eingehender zu untersuchen. .Oxyde des trans-Dehydro-androsterons bzw. seines Acetats sind schon von verschiedener Seite hergestellt worden. Bus dem bei der Oxydation mit Persauren entstehenden Gemisch wurde von den meisteri A~t o r e n~)~) ein Oxyd vom Smp. 228-230O sowie ein Oxidoacetat vom Smp. 222--323O isoliert. Das Oxyd lasst sich durch Beharidlung mit Acetanhydrid in das Osido-acetat uberfuhren5), so dass der Busammenhang zwischen diesen beiden Verbindungen, die im allgenieinen als a-Formen bezeichnet werden, geklart ist. Xur Ehrenstein, der das Acetat vom Smp. 222-223O auch bei der Osydation von trans-Dehydro-androsteron-acetat mit Kaliumpermangsnat in Eisessjg erhalten hatte, gab ihm urspriinglich die Bezeichnung 8-Osidoacetat, die jedoch spatere) in a-Oxido-acetat abgeandert wurde. Bei der gleichen Oxydation isolierte Ehrensteim ein zweites isomeres Oxidoacetat des trans-Dehydro-androsterons, das bei 185-190° schmolz. Anzeichen fiir die Entstehung eines isomeren Oxydes lagen auch bei der Oxydation mit Persauren vor, doch war bei dieser Arbeitsweise das isomere Acetat Tom Smp. 188-190° (von Ehrenstein. ursprunglich a-, spater6) /I-Oxido-acetat genannt) noch nicht erhalten worden.
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