The results confirm the high level of resistance reported, regardless of the species or the strain of Fusarium involved. The high MICs level observed are worrying and suggest that new drugs are needed.
Objective Identifying Fusarium isolates from mycosis symptomatic patients through molecular techniques as PCR and sequencing. Methods In this study, samples were taken from 101 mycosis symptomatic patients in-between [2004][2005][2006]. To determine isolates belonging to the Fusarium genus, the DNAr 28S region was amplified through PCR and specific PCR primers further confirmed their identity to the species level. Additionally, in order to confirm the identity of the species of the isolates, 75 isolates of these were analyzed by partial sequencing of the 28S rDNA and the TEF1-α gene. Results The 28S rDNA portion detected all 101 isolates as belonging to Fusarium and the PCR specific primers detected 52 and 29 isolates as F. oxysporum and F. solani, respectively; 34 and 41 of these, afterwards studied by partial sequencing of the 28S rDNA and TEF1-α genes respectively, were effectively identified by the technique. Conclusion From all the molecular markers used to identify Fusarium isolates, the sequence of the TEF1-α gene provided the best resolution in the identification of species level; however it is possible to discriminate between F. oxysporum and F. solani isolates by PCR, in most of the cases, what is important considering the simplicity of the technique and a faster diagnosis.Key Words: PCR; rDNA; sequence analysis; elongation factor (source: MeSH, NLM). RESUMENObjetivo Identificar aislamientos de Fusarium en pacientes con micosis por medio de las técnicas moleculares de PCR y secuenciación. Métodos Se tomaron 101 muestras de pacientes con micosis sintomática, entre los años 2004 y 2006. Para la detección de aislamientos como pertenecientes al género Fusarium, se amplificó parcialmente por PCR la región 28S del DNAr; y posteriormente -para la detección de la especie de Fusarium-se utilizaron cebadores específicos para F. oxysporum y F. solani. La verificación de la identidad de la especie de los aislamientos se hizo por secuenciación parcial de los genes 28S DNAr y TEF1-α. Resultados El total de 101 aislamientos fueron detectados como pertenecientes al género Fusarium utilizando un cebador universal de la region 28S DNAr; 52 y 29 aislamientos se detectaron como F. oxysporum o F. salani, respectivamente con los cebadores específicos, y la secuenciación parcial de los genes 28S rDNA o TEF1-α confirmó la identidad de las especies. Conclusión La secuenciación parcial del gen TEF1-α es aún el mejor marcador molecular para identificar aislamientos de Fusarium a nivel de especie. Sin embargo, en la mayoría de los casos es posible discriminar entre aislamientos de F. oxysporum y F. solani por PCR con cebadores específicos, lo que proporciona una ventaja importante considerando la simplicidad de la técnica y el rápido diagnóstico.Palabras Clave: ADN ribosómico; PCR; secuenciación; elongación (fuente: DeCS, BIREME).
Introduction: Fusarium is a very heterogeneous group of fungi, difficult to classify, with a wide range of living styles, acting as saprophytes, parasites of plants, or pathogens for humans and animals. Prevalence of clinical fusariosis and lack of effective treatments have increased the interest in the precise diagnosis, which implies a molecular characterization of Fusarium populations.Objective: We compared different genotyping markers in their assessment of the genetic variability and molecular identification of clinical isolates of Fusarium.Materials and methods: We evaluated the performance of the fingerprinting produced by two random primers: M13, which amplifies a minisatellite sequence, and (GACA)4, which corresponds to a simple repetitive DNA sequence. Using the Hunter Gaston Discriminatory Index (HGDI), an analysis of molecular variance (AMOVA), and a Mantel test, the resolution of these markers was compared to the reference sequencing-based and PCR genotyping methods.Results: The highest HGDI value was associated with the M13 marker followed by (GACA)4. AMOVA and the Mantel tests supported a strong correlation between the M13 classification and the reference method given by the partial sequencing of the transcription elongation factor 1-alpha (TEF1-α) and rDNA 28S.Conclusion: The strong correlation between the M13 classification and the sequencingbased reference together with its higher resolution demonstrates its adequacy for the characterization of Fusarium populations.
Objetivo. Proporcionar información sobre el ciclo de vida del psílido de la concha (o del escudo), Glycaspis brimblecombei en Colombia, y sus enemigos naturales, principalmente la avispa parasitaria Psyllaephagus bliteus, en una plantación de eucalipto en Jericó (Antioquia). Alcance. A través de ensayos experimentales, se muestran los resultados del ciclo de vida y las principales características de la plaga, en una plantación de Eucalyptus camaldulensis.Metodología. Los estados de desarrollo del insecto en campo se evaluaron mediante la selección aleatoria de hojas aisladas mediante mangas entomológicas. La identificación de los enemigos naturales se realizó por observación directa y colecta manual durante julio y agosto de 2016. Principales resultados. Primer reporte para Colombia del tiempo de duración en campo del ciclo de vida de G. brimblecombei. El desarrollo completo tuvo una duración de 32.83 ± 4.2 días (promedio ± EE) bajo condiciones de campo (temperatura media: 27°C). Las ninfas alcanzaron una duración de 14.42 ± 1.15 días, entre la eclosión y el estado adulto. El tiempo reportado para cada etapa (I, II, III, IV y V) fue de 4.11 ± 1.17, 7.00 ± 1.13, 9.74 ± 1.51, 11.95 ± 1.64y 13.42 ± 1.7 días, respectivamente. Los enemigos naturales encontrados incluyen insectos de las familias Coccinellidae, Formicidae, Encyrtidae y Crysopidae; se resalta la presencia e importancia del parasitoide P. bliteus, reportado como el principal controlador biológico asociado con la dispersión de la plaga desde su centro de origen (Australia). Conclusiones. El registro de P. bliteus destaca su papel ecológico, comúnmente descrito como agente efectivo de control biológico de este psílido. Estos resultados son fundamentales para establecer futuros programas de MIP en plantaciones forestales de eucalipto en el país.
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