TỔNG HỢP cDNA MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN TOXOCARA EXCRETORY-SECRETORY (TES) -30 BẰNG PHƯƠNG PHÁP HÓA HỌC

Abstract

Bệnh giun đũa chó mèo không có các triệu chứng điển hình nên việc chẩn đoán lâmsàng gặp rất nhiều khó khăn, chủ yếu dựa trên kỹ thuật ELISA phát hiện kháng thể IgG khánglại kháng nguyên chất tiết của Toxocara spp. (Toxocara Excretory-Secretory - TES). TES-30là một trong những kháng nguyên chính, quan trọng và mang tính bảo tồn cao của giốngToxocara, được tiết ra bởi ấu trùng giai đoạn hai khi di chuyển trong cơ thể vật chủ. Do việcnuôi ấu trùng để thu nhận kháng nguyên TES này rất khó khăn nên chúng tôi đã tiến hànhtổng hợp nhân tạo gen mục tiêu mã hóa kháng nguyên TES-30. Đầu tiên, gen mục tiêu (mãsố: AB009305.2) được tối ưu trình tự mã bộ ba cho phù hợp biểu hiện trong tế bào vật chủ E.coli, và 18 đoạn oligos ngắn được thiết kế và tổng hợp bằng phần mềm DNA works, gen mụctiêu được tổng hợp nhân tạo bằng phương pháp PCR hai bước. Tiếp đó, trình tự gen đã tổnghợp được đưa vào vector tách dòng pJET1.2/blunt để kiểm tra khả năng tổng hợp và giảitrình tự gen để để đánh giá kết quả biểu hiện. Kết quả giải trình tự cho thấy phương pháp nàycho phép tổng hợp được trình tự gen mục tiêu với độ chính xác là 3/7 dòng plasmid. Tổnghợp thành công được trình tự gen mong muốn giúp chủ động được nguồn nguyên liệu và mởra triển vọng tổng hợp các gen tái tổ hợp khó trong tương lai