Surubim-do-Paraíba oocytes viability after being exposed to different cryoprotectants

Abstract

To know the non-toxic cryoprotectants to fish oocytes is of extreme importance for tests that aim to increase oocyte resistance to cold, thus allowing more advanced studies in cryopreservation. Therefore, commonly used cryoprotectants such as methanol, dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, propylene glycol, sucrose and fructose were studied. Immature oocytes from the initial to vitelogenic (diameter <1.7 mm) and mature (diameter >1.8 mm) stages of Steindachneridion parahybae were evaluated. Four distinct experiments were performed, three using immature oocytes and one using oocytes at the mature stage. For each oocyte stage, the best maintenance solution to be used: Hank or 50% L15 and; viability after baths for 30min (room temperature) at cryoprotectant concentrations ranging from 0.25 to 4M were evaluated. Different tests were used to evaluate oocyte viability: in vitro maturation followed by observation of germinal vesicle breakdown (only for immature oocytes), Trypan Blue staining (all stages) and fertilization and hatching rates (mature stage only). Results showed that the toxic effect of cryoprotectants on oocytes generally increases with increasing concentrations. Sensitivity of oocytes to cryoprotectants increases according to the stage of development, with mature oocytes being more sensitive. Sucrose, fructose, methanol, propylene glycol and dimethyl sulfoxide can be used as cryoprotectants for S. parahybae oocytes.

Aspectos Econômico Da Piscicultura Na Amazônia Brasileira

“…Entretanto, por serem subjetivos, limitações de verificação da real qualidade são constantemente verificadas, ou seja, apesar de todas as características indicarem que os oócitos têm boa qualidade, muitas vezes isso não se reflete em bons resultados nas taxas de fertilização ou eclosão 82 87 . Assim, algumas alternativas podem ser utilizadas, como o é caso da aplicação do azul de trypan 83 , que coram os oócitos ruins, por serem permeáveis ao corante 84 . A imersão de oócitos durante 3 e 5 minutos com a concentração de 0,2 e 0,4% do corante já se mostrou eficaz para uma espécie de surubim sul-americano 85 .…”

Aquicultura e Pesca: Adversidades e Resultados

“…animal, e poderiam ser descongelados e imediatamente fertilizados, sem a necessidade de maturação in vitro. Porém trabalhos utilizando este estágio, em diferentes espécies, tem verificado que estes apresentam tanto toxicidade aos crioprotetores (Plachinta et al, 2004;Lopes et al, 2018), quanto alta sensibilidade ao frio (Isayeva et al, 2004;Zhang et al, 2005).…”

“…A utilização do tecido ovariano, por outro lado, parece ser promissora, visto que contem múltiplos folículos imaturos com pequeno tamanho, resultando em alta área de superfície em relação ao volume, maior permeabilidade da membrana, bem como ausência de córion totalmente formado (Marques et al, 2015 (Lopes et al, 2018), quanto em testes de sensibilidade ao frio (Isayeva et al 2004;Tsai et al 2009;Lopes et al, submetido para publicação). Porém, a utilização de fragmentos ovarianos de espécies que apresentam desenvolvimento gonadal apresentando diferentes estágios oocitários simultaneamente, como é o caso do S. parahybae (Honji et al, 2016), faz com que a separação dos oócitos seja de extrema necessidade, devido a presença de distintos estágios de maturação.…”

“…Teste semelhando utilizando ovócito de D. rerio mostraram como melhores resultados a utilização das enzimas Colagenase 0,4M, e Hialuronidase 1,6M em banhos de 10 min (Guan et al, 2008). No presente trabalho, apesar de o controle não mostrar diferenças signifi cativas em relação as enzimas Tripsina e Colagenase, acreditamos que para utilização em métodos de criopreservação, a separação mecânica seja o método mais recomendado, pois além de minimizar a manipulação dos ovócitos, também evita alteração da permeabilidade das membranas, o que iria infl uenciar diretamente na toxicidade as soluções crioprotetoras, podendo inclusive torna-las mais sensíveis as mesmas (Lopes et al, 2018). Em relação aos métodos utilizados para avaliar a viabilidade, não foram observadas grandes diferenças para GVBD e TB, com exceção para a enzima Colagenase, com resultados distintos quando utilizada a coloração por TB.…”

MORFOLOGIA DO CORAÇÃO DE TUBARÃO-ANEQUIM (Isurus oxyrinchus) E AGULHÃO-NEGRO (Makaira nigricans)

“…Os oócitos maduros seriam uma alternativa perfeita para criopreservação, por ser de fácil manipulação, não necessitar sacrificar o animal, e poderiam ser descongelados e imediatamente fertilizados, sem a necessidade de maturação in vitro. Porém trabalhos utilizando este estágio, em diferentes espécies, tem verificado que estes apresentam tanto toxicidade aos crioprotetores(Plachinta et al, 2004;Lopes et al, 2018), quanto alta sensibilidade ao frio(Isayeva et al, 2004;Zhang et al, 2005).A utilização do tecido ovariano, por outro lado, parece ser promissora, visto que contem múltiplos folículos imaturos com pequeno tamanho, resultando em alta área de superfície em relação ao volume, maior permeabilidade da membrana, bem como ausência de córion totalmente formado(Marques et al, 2015). Porém, para utilização destes estágios de desenvolvimento, há necessidade que um grande número de ovócitos sejam isolados dos ovários, o que faz dessa etapa um obstáculo para estudos com criopreservação destes gametas.45°35'52''W), usando estoque de reprodutores originados de reprodução induzida de espécies selvagens da Estação de Aquicultura (F1).…”