A família Myrmecophagidae, está presente em todos os biomas Brasileiros. O tamanduá-bandeira é o maior representante desta família, pertencente a ordem Pilosa e a Subordem Xenarthra. Considerando a diminuição da espécie em cerca de 30% nos últimos 10 anos, a União Internacional de Conservação da Natureza (IUCN) inclui essa espécie na classificação de vulnerável, ou seja, a espécie corre um grande risco de extinção em médio prazo. No entanto, mesmo sendo uma espécie com tamanha importância ecológica, informações relevantes sobre a reprodução desses animais ainda é muito escassa na literatura, principalmente quando buscada a reprodução in situ. O presente trabalho teve como objetivo principal validar um protocolo eficiente de colheita farmacológica de sêmen em tamanduás-bandeira de vida livre e de cativeiro. Para isso foram realizadas capturas de 11 exemplares de tamanduá-bandeira adultos, sendo destes, quatro machos de vida livre, e mais dois animais mantidos em cativeiro, para efeito de comparação. A colheita de sêmen por cateterismo uretral quando realizada entre 15 e 20 min após a administração da medetomidina + cetamina (0,08 mg + 5mg/ kg; im) mostrou-se eficaz em 100 % dos animais de vida livre, pois todos os animais ejacularam.Quando comparada nas duas condições, respectivamente para vida livre e cativeiro, a colheita de sêmen farmacológica não mostrou diferença significativa para volume de sêmen (183.