Salah satu bentuk ekosistem air tawar yang merupakan habitat dari berbagai organisme adalah sungai. Sungai Mengaji merupakan sungai yang bersumber dari lereng selatan Gunung Slamet. Sungai selalu mengalami perubahan faktor fisika, kimia, dan biologi. Penurunan kualitas air sungai sangat berdampak terhadap distribusi dan sex ratio udang Macrobrachium pilimanus di Sungai Mengaji. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui distribusi dan sex ratio udang M. pilimanus di Sungai Mengaji. Penelitian dilakukan dengan metode survai untuk penentuan stasiun dan purposive random sampling untuk pengambilan sampel. Sampel yang didapatkan kemudian diidentifikasi dan diukur menggunakan metode morfometri. Penelitian dilakukan antarabulan Juni-Agustus 2020. Data distribusi udang dianalisis menggunakan uji “F” dengan SPSS 2016, sedangkan sex ratio udang di analisis menggunakan rumus sex ratio dari metode Kao dan Liu. Hasil dari penelitian ini ditemukan bahwa distribusi udang M. pilimanus di Sungai Mengaji Banyumas yaitu tidak merata antarstasiun. Distribusinya ditemukan paling tinggi pada Stasiun IV, sedangkan udang betinanya ditemukan paling tinggi pada Stasiun II. Perbandingan jenis kelamin atau sex ratio udang M. pilimanus di Sungai Mengaji Banyumas tidak seimbang dan didominasi oleh betina. Sex ratio-nya ditemukan paling tinggi pada pada Stasiun II.