Short communication: Detection of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis by polymerase chain reaction in bovine milk in Brazil

Abstract

Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (MAP) is the causative agent of paratuberculosis, or Johne's disease, a chronic granulomatous enteritis that affects all ruminants worldwide. Since the isolation of MAP from intestinal tissue of human patients bearing Crohn's disease, there has been a debate on the possibility of this agent playing a role in the etiology of Crohn's disease. Milk could be the potential vehicle for transmission to humans. Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis has already been detected in milk samples worldwide. In Brazil, detection of MAP is uncommon; however, it has already been detected by bacterial isolation and serological test. The aim of this study was to investigate the presence of MAP, by PCR, in raw milk samples in the region of Viçosa, Minas Gerais State, Brazil. Of 222 milk samples evaluated, 8 (3.6%) quarter milk samples amplified fragments of similar size to that expected of 626 bp. These fragments were cloned and sequenced. The genetic analysis revealed a 99% identity match between the sequences obtained in this study and the insertion sequence IS900 deposited in the GenBank. In the analyzed milk samples, MAP DNA was detected, confirming its presence in dairy cattle in the region of Viçosa. This is the first report of MAP presence in raw milk samples in Brazil.

Herd-level prevalence and associated risk factors for Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in cattle in the State of Paraíba, Northeastern Brazil

“…This association has aroused great scientific interest since the 1980s, when Chiodini et al (1984) isolated MAP and its DNA from biological tissues in CD patients. Based on these observations, the link between MAP and CD has been widely investigated through direct and indirect methods for MAP detection (Chiodini et al, 2012). In Brazil, the presence of MAP DNA and the viability of MAP in raw and retail pasteurized milk (Carvalho et al, 2009(Carvalho et al, , 2012 and artisanal coalho cheese (Faria et al, 2014) has been proven, suggesting that live organisms might be transmitted to humans by ingestion of contaminated products.…”

Paratuberculose em pequenos ruminantes domésticos

“…Contudo, darCorso Filho et al (1960) identificaram a doença em bovinos nascidos e criados no Brasil. Registros subsequentes da enfermidade foram verificados em diferentes estados brasileiros (Portugal et al, 1979;raMos et al, 1986;drieMeier et al, 1999;CarValho et al, 2009;, demonstrando que a doença ocorre em rebanhos nacionais. Os métodos para determinar a prevalência da paratuberculose em diferentes estados brasileiros ainda são fundamentados em diferentes metodologias, apresentando resultados que não possibilitam uma avaliação total do acometimento dos rebanhos no país.…”

“…Assim, acredita-se que fato semelhante de suscetibilidade ocorra nas espécies ovina e caprina. Dada essa suposição, deve-se considerar a maior chance de infecções em animais jovens, levando-se em conta a existência de estudos comprovando a presença de MAP no leite e/ou no colostro de vacas, ovelhas e cabras com infecção clínica ou subclínica (sWeeney et al, 1992a;CarValho et al, 2009;diMareli-Malli, 2010).…”

“…A identificação de IS900 em outras micobactérias compromete os diagnósticos quando sustentados exclusivamente por essa sequência de inserção. Desse modo, trabalhos que apresentem amostras positivas para IS900 são confirmados pelo sequenciamento do amplicon e/ ou pelo isolamento de MAP e/ou pela amplificação de outras sequências gênicas (englund et al, 2002;CarValho et al, 2009). Alguns autores identificaram efetividade no diagnóstico para o locus do gene f57 e locus 255 (MöBius et al, 2008), demonstrando que a associação de f57 e/ou locus 255 com o IS900 seria uma alternativa para maior especificidade dos resultados.…”

“…Mesmo assim, ainda não está clara a real importância da bactéria na patofisiologia da doença em humanos, nem os fatores que poderiam efetivamente contribuir para o surgimento da DC. Como inúmeros trabalhos têm demonstrado a presença de MAP em leite cru de bovinos, ovinos e caprinos (singh;Vihan, 2004;neBBia et al, 2006;CarValho et al, 2009), suspeita-se que o leite possa ser um possível veiculador do agente para os humanos. Além do leite cru, alguns trabalhos investigaram o efeito da pasteurização sobre o leite contendo grandes concentrações de MAP.…”