Semisynthesis of a Homogeneous Glycoprotein Enzyme: Ribonuclease C: Part 2

Abstract

Active RNase glycoprotein from three pieces: The glycoprotein enzyme ribonuclease C, which contains a complex saccharide N-glycan, was synthesized by sequential native chemical ligation. An optimized ligation and isolation protocol allowed the efficient assembly and refolding of the 124 amino acid enzyme.

From EPOthilone to EPO: A challenge for natural product synthesis

“…With these nonnative saccharide groups, they were also able to fold their EPO construct into the correct 3D structure and show that it had biological activity similar to recombinant EPO. As evidenced by this semisynthetic work, as well as several other recent glycoprotein syntheses (12,13), the field of glycoprotein synthesis is certainly gaining momentum.…”

Progress in the Ligation Chemistry for Glycoprotein Synthesis

“…This method was also used to synthesize GlyCAM-1 (32). The synthesis of RNase C segment by Unverzagt (Scheme 4) was also achieved (33). However, this method has potential danger of side reactions during the alkylation of the sulfonamide moiety.…”

Racemisierungsfreie Fragmentkondensation C‐terminaler Pseudoprolinpeptide an der Festphase

“…Die versuchte Verlänge-rung des Glycopeptids um nur wenige Aminosäuren führte jedoch zu Sequenzfehlern aufgrund von Acetylwanderung sowie unvollständigen Kupplungen und Entschützungen. [4] Beim Übergang zu ungeschützten Kohlenhydraten kann bei jeder Peptidverlängerung leicht eine zusätzliche O-Acylierung eintreten. [5] Um diese Nebenreaktionen zu umgehen, haben wir konvergente Fragmentkupplungen an der Festphase [6] zur Verlängerung von Glycopeptiden mit ungeschützten Zuckern untersucht.…”

“…[9] Das Glycopeptid RNase 33-39 (A) wurde an einem Doppellinker-PEGA-Harz wie beschrieben aufgebaut. [4] Eine Desacetylierung des GlcNAc-Rests mit verdünntem Hydrazinhydrat [16] führte zu Glycopeptidharz 12. Die drei Verlän-gerungen mit den Fragmenten 5, 6 und 11 wurden mit jeweils zwei ¾quivalenten an Pseudoprolinpeptid und PyBOP in NMP durchgeführt und ergaben einen vollständigen Umsatz nach 1 d bei Raumtemperatur oder nach 1 h im Mikrowellenreaktor [7,17] bei 55 8C (Schema 4).…”

“…Dazu wurde Glycopeptid 16 wie beschrieben aufgebaut (Schema 5). [4] Die Segmentkupplungen wurden bei Raumtemperatur durchgeführt, da die Verlängerung mit dem kürzesten Fragment auch zu O-Acylierung des Zuckers führte (Abbildung S10). Die vorüberge-hende O-Acylierung konnte vor der Fmoc-Abspaltung am Harz [16] durch Hydrazinhydrat rückgängig gemacht werden.…”