Real-time molecular methods to detect infectious viruses

Yeh, Hsiao-Yun; Yates, Marylynn V.; Chen, Wilfred; Mulchandani, Ashok

doi:10.1016/j.semcdb.2009.01.012

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“…A qPCR está sendo cada vez mais utilizada na detecção de agentes infecciosos como vírus e bactérias (Ratcliff et al, 2007). Os métodos com agentes intercalantes têm a vantagem de terem um custo mais acessível (Yeh et al, 2009 Um dos principais problemas encontrados na qPCR com agentes intercalantes é a fluorescência gerada por dímeros de iniciadores (Ponchel et al, 2003). Essa ocorrência é difícil de ser inibida mesmo com a utilização de enzimas do tipo hotstart (Peters et al, 2004 …”

Section: Methodsunclassified

“…Além das vantagens da PCR convencional, existem outras qualidades inerentes à qPCR. As principais vantagens da qPCR são a rapidez do diagnóstico, a elevada sensibilidade analítica e diagnóstica e o risco mínimo de contaminação por não exigir a manipulação dos amplicons, como nos casos da nested PCR ou semi-nested PCR (Yeh et al, 2009). Outro ponto significativo é a amplificação do DNA do agente e a visualização do resultado sem a necessidade de utilização de eletroforese em gel de agarose como ocorre nas PCRs convencionais.…”

unclassified

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PCR em tempo real para detecção do vírus da doença de Aujeszky

Júnior¹,

Cotorello²,

Dias³

et al. 2013

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

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RESUMOO objetivo deste trabalho foi desenvolver uma PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico rápido e sensível da doença de Aujeszky. Os iniciadores amplificaram um fragmento de 123 pares de base do gene codificante da glicoproteína D. A qPCR foi testada em 25 amostras de cérebro de suíno positivas e 85 amostras negativas para DA no isolamento viral e na soroneutralização. A sensibilidade analítica foi calculada com acréscimo de um isolado brasileiro do SuHV-1 titulado em amostras de cérebro de suíno negativas na soroneutralização e na PCR. A técnica apresentou sensibilidade analítica de 10 -0,5 TCID50/50µL. A qPCR foi capaz de distinguir reações inespecíficas devido a dímero de oligonucleotídeos iniciadores ou amplificações, além do alvo designado (evitando, assim, os falsopositivos), e de obter resultados rápidos. Palavras-chave: suínos, qPCR, validação, doença de Aujeszky ABSTRACT The aim of this study was to validate a low-cost real-time PCR for a quick and sensitive diagnosis of the

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Section: Methodsunclassified

unclassified

PCR em tempo real para detecção do vírus da doença de Aujeszky

Júnior¹,

Cotorello²,

Dias³

et al. 2013

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

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“…Cross-reactivity can also impede the clinical application of immunological assays (9,10). Moreover, PCR method is limited to detect only one type of pathogens in spite of high sensitivity and specificity (11). Therefore, in clinical work, it would be better to rapidly and simultaneously detect the pathogens and identify the type of herpes viruses.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Rapid Etiologic Diagnosis of Herpes Virus Infections in Children

Liu

Shen

et al. 2017

Iran J Pediatr

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Background: Human herpes viruses, as common viruses, not only affect mainly the skin, mucosa, and nervous tissue, but also can cause a variety of serious diseases in children. Objectives: The aim of this study was to determine the sensitivity and specificity of multiplex PCR-based DNA microarray technology in comparison with PCR method and IgM ELISA. Methods: A total of 108 blood samples from children with viral infections were collected and analyzed by multiplex PCR-based DNA microarray technology, PCR method, and IgM ELISA. Results: Of 108 specimens, 16 were positive which gave a positive rate of 14.8%. Most of the patients were infected with EBV and HCMV. The sensitivity and specificity of this technology for detecting human herpes viruses were 100% when compared to PCR method. The crude agreement between multiplex PCR-based DNA microarray technology and IgM ELISA for detecting human herpes viruses was 95.4%. Conclusions:The results indicated that multiplex PCR-based DNA microarray technology is a rapid auxiliary diagnostic method for simultaneous detection of the seven common herpes viruses with high sensitivity and specificity.

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“…One of the early applications of these nano-devices is in the field of nanosensing [24], [14], [6]. Nanosensors are not just tiny sensors, but devices that take advantage of the properties of novel nanomaterials to identify and measure new types of events in the nanoscale, such as chemical compounds in concentrations as low as one part per billion [17], [15], or the presence of virus or harmful bacteria [23], [19].…”

mentioning

confidence: 99%