PCR em tempo real para detecção do vírus da doença de Aujeszky

Abstract

RESUMOO objetivo deste trabalho foi desenvolver uma PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico rápido e sensível da doença de Aujeszky. Os iniciadores amplificaram um fragmento de 123 pares de base do gene codificante da glicoproteína D. A qPCR foi testada em 25 amostras de cérebro de suíno positivas e 85 amostras negativas para DA no isolamento viral e na soroneutralização. A sensibilidade analítica foi calculada com acréscimo de um isolado brasileiro do SuHV-1 titulado em amostras de cérebro de suíno negativas na soroneutralização e na PCR. A técnica apresentou sensibilidade analítica de 10 -0,5 TCID50/50µL. A qPCR foi capaz de distinguir reações inespecíficas devido a dímero de oligonucleotídeos iniciadores ou amplificações, além do alvo designado (evitando, assim, os falsopositivos), e de obter resultados rápidos. Palavras-chave: suínos, qPCR, validação, doença de Aujeszky ABSTRACT The aim of this study was to validate a low-cost real-time PCR for a quick and sensitive diagnosis of the

Different methods of real-time PCR for detection of pseudorabies virus

“…Diagnostic specificity was tested using seventy samples (swine brain) collected from three FONSECA JR et al (2013). Testing repeatability occurred on three consecutive days, using seven different samples in triplicate (a sample in LD concentration, three samples a log above LD and three samples ½ log above LD in the respective concentrations from, 10 -1.5 TCID50 mL -1 , 10 -1.0 TCID50 mL -1 and 10 -0.5 TCID50 mL -1 ).…”

Evolutionary Diversity of Suid Herpesvirus 1 Based on Ul44 Partial Sequences

“…At 3, 6, and 24 h after inoculation, cells were harvested and subjected to DNA extraction using a Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit (Promega, USA). Virus DNA and reference genes were quantified by real-time PCR as described previously [32]. Virus concentration was measured using virus growth in PK15 as a reference.…”