Rapid detection and differentiation of bovine herpesvirus 1 and 5 glycoprotein C gene in clinical specimens by multiplex-PCR

Claus, Marlise Pompeo; Alfieri, Alice Fernandes; Folgueras-Flatschart, Áurea Valadares; Wosiacki, Sheila Rezler; Médici, Kerlei Cristina

doi:10.1016/j.jviromet.2005.05.001

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“…Similar studies with experimentally infected calves using DNA extracted from formalin-fixed, paraffin-embedded brain tissue detected 32.8% (Arruda et al 2010), 33.3% (Pedraza et al 2010) 66.6% (Gomes et al 2002), 75% (Ferrari et al 2007) and 87.5% (Ely et al 1996) of the positive animals using PCR, multiplex PCR, or nested PCR. Similar to our results, but using DNA extracted from frozen tissue, 100% of the BHV-5-positive animals using semi-nested PCR (Claus et al 2005) and PCR (Isernhagen et al 2011) were reported.…”

Section: Fig2 Adjusted Geometric Means* Of Lesions Distributed By Asupporting

confidence: 89%

“…PCR was performed as previously described (Claus et al 2005) and β-actin (GenBank, NC_007326.4) was used as internal control for the evaluation of DNA extraction efficiency and DNA integrity in all of the PCR reactions. The primer sets used in the PCR, which amplified a 159-bp fragment of the BHV-5gC gene (GenBank, U35883.1) and an 87-bp fragment of the Bos Taurus β-actin gene, are presented in Table 1.…”

Section: Dna Isolation and Pcr Assaymentioning

confidence: 99%

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Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves

et al. 2015

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RESUMO.-[Estudo histopatológico, imuno-histoquími-co e molecular da infecção por BHV-5 no sistema nervoso central de bovinos experimentalmente infectados.]A meningoencefalite bovina causada pelo BHV-5, um vírus DNA fita dupla envelopado que pertence à família Herpesviridae e subfamília Alphaherpesvirinae, é um importante diagnóstico diferencial das doenças do sistema nervoso central. O objetivo deste estudo foi descrever as alterações histológicas no sistema nervoso central de bovinos experimentalmente infectados com BHV-5 e comparar estas alterações com os resultados de imunoistoquímica (IHQ) e PCR. Amostras do sistema nervoso central de bezerros previamente inoculados com BHV-5 foram microscopicamente avaliadas e submetidas à IHQ e PCR. Todos os animais apresentaram meningoencefalite não-supurativa. Das 18 áreas avaliadas de cada bezerro, 32,41% e 35,13% foram positivas na IHQ e PCR, respectivamente. O telencéfalo apresentou lesões mais acentuadas e foi mais positivo na PCR do que as demais áreas encefálicas e se apresentou como a melhor área para coleta de material para o diagnóstico. As áreas positivas na IHQ e na PCR apresentaram lesões mais acentuadas do que as áreas negativas para as mesmas téc- Bovine meningoencephalitis caused by BHV-5, a double-stranded DNA enveloped virus that belongs to the family Herpesviridae and subfamily Alphaherpesvirinae, is an important differential diagnosis of central nervous diseases. The aim of this study was to describe the histological changes in the central nervous system of calves experimentally infected with BHV-5 and compare these changes with the PCR and IHC results. Formalin-fixed paraffin--embedded central nervous system samples from calves previously inoculated with BHV-5 were microscopically evaluated and tested using IHC and PCR. All the animals presented with nonsuppurative meningoencephalitis. From 18 evaluated areas of each calf, 32.41% and 35.19% were positive by IHC and PCR, respectively. The telencephalon presented more accentuated lesions and positive areas in the PCR than other encephalic areas and was the best sampling area for diagnostic purposes. Positive areas in the IHC and PCR were more injured than IHC and PCR negative areas. The animal with neurological signs showed more PCR-and IHC-positive areas than the other animals.INDEX TERMS: Bovine herpesvirus 5, diseases of cattle, meningoencephalitis, neuropathology.

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Section: Fig2 Adjusted Geometric Means* Of Lesions Distributed By Asupporting

confidence: 89%

Section: Dna Isolation and Pcr Assaymentioning

confidence: 99%

Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves

et al. 2015

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“…Posteriormente, foi separado um bloco de parafina de uma região do encéfalo que apresentava lesão sugestiva de PEM para realizar a técnica da PCR para detecção do DNA do herpesvírus bovino tipo 5. A extração do DNA dos blocos de parafina foi realizada com DNA FFPE Tissue kit 10 e a técnica da PCR foi realizada segundo protocolo estabelecido por Claus et al (2005).…”

Section: Methodsunclassified

Surto de polioencefalomalacia por ingestão excessiva de enxofre na dieta em bezerros no Rio Grande do Sul

Cunha

Bandarra²,

Dias³

et al. 2010

Pesq. Vet. Bras.

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613Pesq. Vet. Bras. 30(8):613-617, agosto 2010 RESUMO.-Neste trabalho descreve-se surto de polioencefalomalacia em bovinos decorrente da ingestão de dieta com excessiva concentração de enxofre em uma propriedade no Rio Grande do Sul. O lote era composto por 30 bezerros, mantidos em um piquete com azevém (Lolium multiflorum) e suplementados com ração e sal mineral. Seis bezerros morreram e dois deles foram necropsiados; amostras de tecido hepático para dosagem de chumbo e fragmentos do sistema nervoso central para histopatológico foram colhidos. Um dos bezerros foi examinado antes da morte e sinais neurológicos encefálicos foram constatados. Foi estabelecido o teor de enxofre nos componentes da dieta e água, a produção de sulfeto de hidrogênio ruminal em cinco bovinos do mesmo lote e realizada PCR de um bloco de parafina para detecção de DNA do herpevirus bovino tipo 5. O consumo total de enxofre foi de 0,38% da matéria seca fornecida aos animais e as dosagens de sulfeto de hidrogênio ruminal em animais do mesmo lote variaram de 1.000 a 2.500ppm. Os achados histopatológicos indicaram necrose laminar do córtex cerebral. Não foi detectado chumbo na amostra de tecido hepáti-co e não foi identificado DNA do herpesvirus bovino tipo 5 no encéfalo. O quadro clínico de síndrome cerebrocortical associado aos elevados valores do sulfeto de hidrogênio ruminal, alta ingestão de enxofre na dieta e os achados histopatológi-cos permitem estabelecer o excesso de enxofre como causador da polioencefalomalacia. An outbreak of polioencephalomalacia in cattle caused by ingestion of high sulphur diet, in Rio Grande do Sul, Brazil is described. One group of 30 calves was kept in Italian ryegrass (Lolium multiflorum) pasture and supplemented with concentrate and minerals. Six calves died, necropsy was performed in two of them and liver samples (for lead determination) and fragments of central nervous system were collected. Clinical and neurological examination was performed in one calf and confirmed brain involvement. Sulphur content on dietary components and water, ruminal hydrogen sulfide production in five calves of the same group and PCR from formalin-fixed paraffin-embedded cerebral tissues to detect bovine herpesvirus 5 DNA was perfomed. The total sulphur intake was 0.38% dry matter and the values of ruminal sulfide concentration ranged from 1,000 to 2,500ppm. Lead It was not detected in the liver samples and PCR was negative for bovine herpesvirus 5. The brain lesions were characterized by laminar neuronal necrosis. The clinical signs of cerebrocortical syndrome associated with high ruminal sulfide values, elevated intake of dietary sulphur and histological lesions confirmed that the excess of sulphur caused the polioencephalomacia in these calves.INDEX TERMS: Cerebrocortical necrosis, diagnostic, ruminal hydrogen sulfide.

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“…O LCR foi submetido à PCR, sem a etapa de extração do ácido nucleico. Nos fragmentos do encéfalo, o DNA foi extraído e submetido à PCR conforme os métodos descritos por Claus et al (2005), com algumas modificações descritas a seguir na técnica de PCR. A reação de PCR foi realizada, utilizando-se 5µL do LCR (in natura) e 45µL de mix, constituído por 20pmol de cada oligonucleotídeo iniciador (primer) B5 (5'-CGG ACG AGA CGC CCT TGG-3', nt 322-339) e Bcon (5'-AGT GCA CGT ACA GCG GCT CG-3', nt 461-480); 2,0mM de dNTP (Invitrogen™ Life Technologies, EUA); cinco unidades de Taq platinum DNA polimerase (Invitrogen™ Life Technologies, EUA); 1x PCR buffer (50mM KCl e 20mM Tris-HCl pH 8,4); 1,5mM MgCl 2 ; 8% de dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma Co., EUA) e água ultrapura estéril para completar o volume.…”

unclassified

Presença do genoma de BoHV-5 no líquido cefalorraquidiano de bovinos com meningoencefalite herpética

Massitel

Wesgueber

Oliveira

et al. 2016

Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.

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Presença do genoma de BoHV-5 no líquido cefalorraquidiano de bovinos com meningoencefalite herpética (Isernhagen et al., 2011). A evolução até a morte é variável, podendo ser de um a 15 dias (Elias et al., 2004;Isernhagen et al., 2011).Diferentes técnicas podem ser utilizadas para a confirmação do diagnóstico post mortem, como histopatologia, imuno-histoquímica, isolamento viral e a reação em cadeia da polimerase (PCR). As coletas do LCR foram realizadas no espaço atlanto-occipital, utilizando-se a agulha metálica do cateter intravenoso 18G com 5cm de comprimento (BD Angiocath) e aspiração com seringa de 1mL. O LCR foi mantido refrigerado até a chegada ao laboratório. A eutanásia, seguida de necropsia, foi realizada após a coleta do LCR, com a finalidade de confirmação do diagnóstico e em comum acordo com o proprietário, considerando a evolução da doença, a gravidade das manifestações clínicas e a probabilidade reduzida de resposta a tentativas de tratamentos. Fragmentos do encéfalo foram http://dx

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Rapid detection and differentiation of bovine herpesvirus 1 and 5 glycoprotein C gene in clinical specimens by multiplex-PCR

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Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves

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Surto de polioencefalomalacia por ingestão excessiva de enxofre na dieta em bezerros no Rio Grande do Sul

Presença do genoma de BoHV-5 no líquido cefalorraquidiano de bovinos com meningoencefalite herpética

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