Purification and characterization of a thermodynamic stable serine protease from Aspergillus fumigatus

Hernández-Martínez, R.; Gutiérrez-Sánchez, Gerardo; Bergmann, Carl; Loera, Octavio; Rojo‐Domínguez, Arturo; Huerta‐Ochoa, Sergio; Regalado‐González, Carlos; Prado-Barragán, Lilia Arely

doi:10.1016/j.procbio.2011.07.013

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“…The inhibitory assay was performed as described by Hernández-Martínez et al (2011) with slight modification. Four different inhibitors, namely 5 mM phenyl-methylsulfonyl fluoride (PMSF, active site inhibitor), 5 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, metalloprotease inhibitor), 5 mM 4-(2-aminoethyl)benzenesulfonylfluoride hydrochloride (AEBSF HCl) and calpain inhibitor I (ALLN) were used.…”

Section: Protease Inhibitor Activitymentioning

confidence: 99%

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Striped murrel S1 family serine protease: immune characterization, antibacterial property and enzyme activities

et al. 2014

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Abstract:We report a molecular characterization of S1 family serine protease (SP-1) from snakehead murrel (or called striped murrel) Channa striatus (Cs). CsSP-1 polypeptide contained a catalytic core domain (otherwise known as serine protease trypsin domain) between H 20 and I 237 along with a catalytic triad at H 61 , D 104 and S 197 . Phylogenetic analysis confirmed that CsSP-1 belongs to serine protease S1 family. The tertiary structure showed that CsSP-1 contains 14 β-sheets as 2 separate β-barrels (the first β-barrel consists of 8 β-sheets in the N-terminal region and the second β-barrel consists of 6 β-sheets in the C-terminal region) and 3 α-helical regions. Significantly (P < 0.05) the highest CsSP-1 mRNA expression was observed in intestine, liver and kidney, moderate expression was seen in spleen, head kidney, skin and blood, and the lowest one in brain, gill, muscle and heart. Further, the expression was induced in intestine with fungus Aphanomyces invadans and bacteria Aeromonas hydrophila. The recombinant CsSP-1 protein showed antibacterial activity against both gram-negative and gram-positive bacteria. The optimum CsSP-1 enzyme activity against the substrate casein was determined at 8 mM casein concentration. Moreover, the activity was highly influenced by 5 mM phenyl-methylsulfonyl fluoride followed by ethylenediaminetetraacetic acid, 4-(2-aminoethyl)benzenesulfonylfluoride hydrochloride and calpain inhibitor I. The CsSP-1 enzyme exhibited the highest activity at pH 7.5 and temperature 35• C. The overall results showed the potential involvement of CsSP-1 in the immune system of murrels. However, further research is necessary to study the mechanism of implicit trypsin association in the defence process.

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Section: Protease Inhibitor Activitymentioning

confidence: 99%

“…The inhibitory activity was measured at optical density 400 nm. The inhibitory activity was calculated as described by Hernández-Martínez et al (2011).…”

Section: Protease Inhibitor Activitymentioning

confidence: 99%

Striped murrel S1 family serine protease: immune characterization, antibacterial property and enzyme activities

et al. 2014

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“…Fungos filamentosos, tais como os pertencentes ao gênero Aspergillus, são capazes de crescer em meio de cultura de baixo custo e produzir grandes quantidades de enzimas (HERNÁNDEZ-MARTÍNEZ et al, 2011). As proteases microbianas de espécies do gênero Aspergillus têm sido bastante estudadas, uma vez que são conhecidas pela sua capacidade de secretar níveis elevados de enzimas no ambiente de crescimento.…”

Section: Produção De Proteases Por Fungosunclassified

“…A partir das inclinações das linhas das retas da Figure 18, MARTÍNEZ et al, 2011;MELIKOGLU, LIN e WEBB, 2013). ; t 1/2 = 1,08 h; T = 50°C) (HERNÁNDEZ-MARTÍNEZ et al, 2011).…”

Section: Estudo Termodinâmicounclassified

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Produção de proteases por fungos filamentosos isolados do cerrado do centro-oeste brasileiro

Souza¹

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São Paulo, 26 de fevereiro de 2015. AGRADECIMENTOÀ minha família, minha mãe, meu pai e meus irmãos pelo incentivo, pelas preocupações e pelo total apoio durante esses anos do doutorado. Ao Felipe pelo amor, companhia, incentivo e compreensão.Ao professor Adalberto Pessoa Junior pela orientação, apoio, confiança, incentivo e disponibilidade sempre apresentada ao longo de todos os anos de trabalho.Á professora Pérola pela orientação, confiança, amizade e por todos os momentos de aprendizado que passamos juntos. Alla professoressa Patrizia per l'orientamento, l'incoraggiamento, comprensione e l'assistenza durante il soggiorno a Genova.Ao professor Attilio pela orientação confiança, ensinamentos e apoio durante o período que permanecia em Gênova, bem como após a volta para o Brasil.Ao professor Edivaldo Ximenes pelo apoio, por disponibilizar as espécies de fungos filamentosos, e por disponibilizar espaço e estrutura do Laboratório de Enzimologia do Instituto de Biologia da Universidade de Brasília (UnB).Aos colegas da UnB, Renata, Raquel, Carol, Marcela, Luana, Gabi, Márcia, Mona, Diegue, Patrícia e Michelle pela colaboração, apoio e amizade. All'amici del l'Università di Genova, Bahar, Alberto, Marco, Matia, Davide e Marcos per il supporto e l'amicizia.Aos colegas da USP, Bruna, Rafaela, Angela, Valker, Alex e Thalita pelo apoio e amizade.À FAPESP pelo apoio financeiro e pela bolsa de doutorado, e à CAPES pela bolsa de doutorado sanduíche. A enzima apresentou massa molecular de 50,6 kDa, e a análise do zimograma confirmou a atividade proteolítica. Além disso, a protease purificada foi inibida pelo composto pepstatina, indicando uma característica de protease ácida. Esses resultados obtidos demonstram um fungo filamentoso produtor de uma nova protease ácida com potencial aplicação para indústria farmacêutica e de cosméticos.Palavras-chave: protease ácida; fungos filamentosos; Aspergillus foetidus; termodinâmica; purificação; cultivo submerso; otimização Le proteasi acide appartengono al gruppo più importante di enzimi industriali prodotte da funghi filamentosi, con applicazioni nell'industria alimentare, cuoio, farmaceutico e cosmetico. Questo studio si propone la valutazione di acido extracellulare proteasi produzione da funghi filamentosi isolati da campioni diversi del Midwest cerrado Brasile. Inizialmente, è stato eseguito uno screening per valutare la capacità dei 17 ceppi di lievito per la produzione di proteasi-agar contenente coltura di latte. Il fungo Aspergillus foetidus è stato selezionato come il miglior produttore.Volti ad ottimizzare la produzione di proteasi dal fungo selezionato, prima valutata l'influenza di vari fattori sulla coltivazione (pH, temperatura, agitazione e diverse fonti di azoto e carbonio). Dopo questo passo, un disegno sperimentale statistica è stata effettuata con temperatura variabili indipendenti, pH iniziale della fonte di carbonio e azoto medio. Le migliori condizioni per la produzione di proteasi erano (63,7 U/mL):pH iniziale valori superiori a 7,0, a 28 °C, 150 rpm peptone ...

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Retracted: Production, biochemical characterization, and kinetic/thermodynamic study of novel serine protease from Aspergillus avenaceus URM 6706

Silva

Queiroz

et al. 2020

Biotechnology Progress

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Purification and characterization of a thermodynamic stable serine protease from Aspergillus fumigatus

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Striped murrel S1 family serine protease: immune characterization, antibacterial property and enzyme activities

Striped murrel S1 family serine protease: immune characterization, antibacterial property and enzyme activities

Produção de proteases por fungos filamentosos isolados do cerrado do centro-oeste brasileiro

Retracted: Production, biochemical characterization, and kinetic/thermodynamic study of novel serine protease from Aspergillus avenaceus URM 6706

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