Production of Lentiviral Vectors Encoding Recombinant Factor VIII Expression in Serum-Free Suspension Cultures

Abstract

ABSTRACT

Generation of stable suspension producer cell lines for serum‐free lentivirus production

“…Transient, serum-free LV production can also be performed using suspension-adapted HEK293(T) cells. [54][55][56][57][58] Based on a recent report of a transient 2000 L stirred-tank bioreactor process for the production of adeno-associated viruses, [59] it is likely that transient LV productions can be scaled up in a similar way. However, for large-scale processes, the use of stable producer cell lines is a more cost-effective alternative to transient processes due to the high cost of GMP-grade plasmids, which are required in large quantities.…”

Avaliação do potencial de crescimento e produção de proteínas recombinantes de células humanas adaptadas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino

“…Em 2015, pesquisadores avaliaram a produção de um fator IX mutado na célula Huh-7 e observaram o aumento da atividade de coagulação quando injetado em ratos (PEROT et al, 2015). Outros estudos demonstraram a produção de vírus e outras proteínas recombinantes nesta célula (NAKABAYASHI et al, 1984;SAINZ & CHISARI, 2006 (AMARAL et al, 2016;BIAGGIO et al, 2015;CARON et al, 2015;CASTILHO-FERNANDES et al, 2011;FANTACINI et al, 2016;FREITAS et al, 2017, PICANÇO-CASTRO et al, 2007ROSA et al, 2012.…”

Estabelecimento de uma plataforma para produção de vetores lentivirais para a modificação de linfócitos T com CAR anti-CD19

“…Assim como a tricostatina A, o ácido valproico, e outros inibidores da histona deacetilase, o NaBu previne a compactação do DNA, facilitando a transcrição do RNA e aumentado a produção das partículas virais (JAALOUK et al, 2006;KAROLEWSKI et al, 2003). Diversos trabalhos já relataram o aumento da produção de partículas lentivirais ao se adicionar NaBu a uma concentração final 2 a 20 mM (ANSORGE et al, 2009;CARON et al, 2015;MERTEN, 2004;SAKODA et al, 1999;SENA-ESTEVES et al, 2004 A ultracentrifugação é o método mais comum de se concentrar vetores lentivirais pseudotipados com VSV-G. Este método, no entanto, possui algumas desvantagens: necessidade de acesso a uma ultracentrífuga; é um processo demorado; e a manutenção e materiais utilizados são caros (PAPANIKOLAOU et al, 2013). Na primeira vez que esse método foi descrito, Burns et al (1993) relataram uma taxa de recuperação das partículas virais de 96%.…”