PCR Multiplex fluorescente para detecção de bactérias em sêmen bovino

Abstract

<jats:p>Este estudo teve como objetivo avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR multiplex fluorescente aliada a eletroforese capilar na detecção de agentes infecciosos em amostras de sêmen experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes das bactérias Brucella abortus, Leptospira interrogans sorovar pomona, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. Amostras de sêmen bovino foram experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes de bactérias obtidas através de diluições seriadas na base 10 de modo a obter-se amostras contendo desde 1 vez até 10-7 bactérias/mL a partir da concentração inicial de Leptospira pomona, Brucella abortus, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. As diluições foram efetuadas individualmente para cada bactéria, bem como nas diferentes concentrações necessárias para a padronização do teste de multiplex PCR. As extrações de DNA de todas as soluções contendo espermatozóides e bactérias analisadas no presente estudo foram realizadas segundo protocolo descrito por Heinemann et al. (2000). Os produtos de PCR multiplex foram avaliados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8% e separação eletroforética por sistema capilar em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA MegaBace. Observou-se a amplificação de fragmentos de 193pb, 330pb, 400pb e 415pb a partir do DNA de B. abortus, L. pomona, H. somnus, C. fetus, respectivamente. Na análise por eletroforese capilar de produtos da PCR multiplex do DNA para detecção simultânea dos quatro patógenos observou-se a sinal de positividade até a diluição de 10-3 bactérias/mL vezes da concentração inicial da solução estoque de cada bactéria. A técnica de PCR multiplex aliada à eletroforese capilar foi usada pela primeira vez para o diagnóstico direto de quatro bactérias patogênicas no sêmen, demonstrando ser um método rápido na detecção de bactérias causadoras de doenças reprodutivas.</jats:p>

Chemical Profiles of Polyphenols in Aqueous Infusion of Yerba Mate and Tea Mate (Ilex Paraguariensis) From Argentina, Brazil and Uruguay

“…Com a técnica de inseminação artificial, um touro consegue produzir até 500 doses de sêmen por ejaculado (Dias et al, 2012 (ou até melhores), do que touros com sêmen mais caro. Geralmente, touros que produzem sêmen em abundância, mas que tem baixa procura, possuem valores de comercialização mais acessíveis, quando comparados a animais que produzem menos sêmen por unidade de tempo e possuem boa procura no mercado (Cardoso, 2009).…”

Potencial Das Florestas Plantadas No Agronegócio Brasileiro

“…Com a técnica de inseminação artificial, um touro consegue produzir até 500 doses de sêmen por ejaculado (Dias et al, 2012). Multiplicando muito sua capacidade reprodutiva.…”

Aplicação E Avaliação De Diferentes Corantes Naturais Em Células Solares

“…Com a técnica de inseminação artificial, um touro consegue produzir até 500 doses de sêmen por ejaculado (Dias et al, 2012). Multiplicando muito sua capacidade reprodutiva.…”