Particularities of cloning of Escherichia coli rpoBC-operon fragments in the pUC plasmids

Abstract

Введение. ДНК-зависимая РНК-полимераза Е. coli является основным ферментом транскрипции. Голофермент РНК-полимеразы включает β-, β'-, σ-и две α-субъединицы, кодируемые генами rpoB, rpoC, rpoD и гроА соответственно [1]. Гены, кодирующие β-и р'-СубъвДИНИЦЫ, являются частью огіерона, включающего также гены rplA, rplL, rplJ и rplK, кодирующие синтез соответственно рибосомальных белков Li, L7/L12, LlO и Lll [1]. Известно, что в состав этого оперона входят два сильных промотора Pi 1 (транскрипция генов rplK (Lll) и rplA (Li)) и Pio(Pj) (транскрипция генов rplJ (LlO) и rplL (L7/L12)) и два слабых-P^ и /у, направляющих транскрипцию генов гроВ и гроС. Изучение функциональной топографии и генетические исследования РНК-полимеразы Е. Coli 1 естественно, требуют получения рекомбинантных молекул, включающих гены, определяющие синтез субъединиц этого фермента. С этой целью на основе многокопийной плазмиды ρUC [2] и космиды pJC703 [3] нами был сконструирован ряд рекомбинантных плазмид, включающих фрагменты гроВС-оперона Е. coli, и изучены особенности ориентации этих фрагментов в рекомбинантных плазмидах.