Osteopontin Expression in Polarized MDCK Cells

Abstract

The aim of this study is to indicate expression of osteopontin (OPN) in Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells with different confluences (10, 50, 90, 100%). OPN expression were investigated by western blotting. An increase in OPN expression was observed due to the increased confluency and subsequent initiation of polarization. Expression profiles of flotillin-2 in the same cells were used as a control, since this protein is ubiquitously produced in MDCK cells and its expression rates are independent of confluence and / or polarization. Intracellular distribution of OPN was also monitored by confocal microscopy on preparations immunolabeled with anti-OPN antibodies. Staining patterns have also confirmed increased OPN expression, especially mannose rich isoforms showed an increase dependent on confluency and polarization in MDCK cells. The results were concluded that increased OPN expression during confluency and polarization in MDCK cells. The state of confluence and polarization have significant effects on the mannose rich OPN expression profile. Keywords: Osteopontin, Polarization, MDCK cells, Western Blotting Polarize MDCK Hücrelerinde Osteopontin Ekspresyonu ÖzetÇalışmada, farklı hücre yoğunluklarındaki (%10, 50, 90 ve 100) Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) hücrelerinde, osteopontin (OPN) ekspresyonunun araştırılması amaçlandı. OPN ekspresyonu, western blotting ile araştırıldı. Polarizasyonun başlamasını takiben ve hücre yoğunluktaki artışa bağlı OPN ekspresyonunda artış gözlendi. Hücrelerdeki flotillin-2'nin ekspresyon profili kontrol olarak kullanıldı. Flotillin-2 proteininin ekspresyon hızı, hücre yoğunluğu ve/veya polarizasyona bağımlı olmadan MDCK hücrelerince üretilmektedir. OPN'nin hücre içi dağılımı anti-OPN antikor ile immun işaretleme yapılarak konfokal mikroskopta görüntülendi. MDCK hücrelerindeki hücre yoğunluğuna bağlı artan OPN ekspresyonu, görüntülenen bantlarla teyit edildi. Özellikle OPN'nin mannozdan zengin izoformlarının ekspresyonunun uyarıldığı tespit edildi. Sonuçlara göre, hücre yoğunluğu ve polarizasyona bağlı olarak, MDCK hücrelerinde OPN ekspresyonunda artış gözlendi. Hücre yoğunluğu ve polarizasyon durumu, mannozdan zengin OPN'nin ekspresyon profili üzerine önemli etkisi bulunmaktadır.

The Use of Decellularized Animal Tissues in Regenerative Therapies

“…Ayrıca, pre-osteoblastların olgun osteoblastlara ve osteositlere farklılaşmasını bir transkripsiyon faktörü olan Osterix (Osx) düzenler [45] . MKH'lerden osteoblastlara farklılaşma Runx2, alkalen fosfataz (ALP), Tip I Kollajen (Col I), osteopontin (OPN) ve osteokalsin (OC) gibi genlerinin ifadelerindeki artış ile karakterizedir [46][47][48] . Kondrogenezin erken aşamalarında hiyalüronik asit (HA) ve kondroitin sülfat (CS) kondrojenik bir transkripsiyon faktörü olan Sox9'un ifadesini arttırırken; kollajen tip-I (fibroblastik işaretçi) ifadesinin azalmasına neden olmaktadır.…”