O milho é uma das principais culturas agrícolas do mundo e uma fonte importante de amido, açúcar, óleo e proteínas. O Brasil é o terceiro maior produtor mundial desta cultura e o uso de sementes com alto potencial fisiológico é fundamental quando se objetiva alcançar o maior potencial produtivo da lavoura de milho. O teste de germinação tem sido o método usado para avaliar a viabilidade de lotes de sementes, mas o teste de tetrazólio é uma técnica alternativa promissora, pois este pode ser realizado em poucas horas e fornece informações suficientes sobre a qualidade fisiológica das sementes. A análise de imagens de sementes submetidas ao teste de tetrazólio permite uma avaliação precisa e objetiva da qualidade das sementes, mitigando a subjetividade e falta de precisão na interpretação dos resultados. O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade fisiológica de lotes de sementes de milho colhidos no Estado de Alagoas, por meio do teste de tetrazólio utilizando recursos de análise de imagens e, ao mesmo tempo, buscou-se otimizar esse teste, estabelecendo padrões e técnicas para auxiliar na interpretação dos resultados obtidos. A avaliação do potencial fisiológico dos cinco lotes de sementes de milho foi realizada utilizando o delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro repetições de 50 sementes. As sementes foram colocadas em papel de germinação úmido, na proporção de 2,5 vezes a quantidade de água em relação ao peso do papel. A embebição foi feita durante aproximadamente 16 h à temperatura de 30 ºC. As sementes de milho foram seccionadas longitudinalmente e medianamente através do embrião. Após o corte, a metade de cada semente em que a identificação das partes do embrião ficou mais clara foram colocadas em copinhos descartáveis de plástico, imediatamente submersa na solução de tetrazólio (0,075%) e levada à câmara regulada a 40 ºC. Durante o processo de coloração, as sementes foram mantidas em ambiente escuro. O tempo de coloração foi de 180 minutos. Atingida a coloração ideal dos embriões, a solução foi eliminada e as sementes lavadas em água corrente por 60 segundos de lavagem e conservadas imersas em água. Para avaliar a viabilidade e o vigor das sementes, foi examinado criteriosamente o embrião com o auxílio de uma lupa com a ampliação de 6x e, de acordo com o nível de danos e a deterioração, as sementes foram classificadas em três classes. Na Classe 1, foram incluídas as sementes vigorosas, na Classe 2, as viáveis com baixo vigor, e, na Classe 3, as sementes não viáveis. O método de análise de imagens se mostrou uma ferramenta valiosa na determinação do vigor e viabilidade de sementes de milho, em um período curto quando comparado a métodos convencionais. A possibilidade de ampliação das imagens permite uma análise precisa das estruturas do eixo embrionário, o que pode contribuir para a melhoria na seleção de lotes de sementes e, consequentemente, da produtividade agrícola.