Kontinuierlich messende Verfahren zur Aktivitätsbestimmung der α-Amylase im Serum Vergleich zu amyloklastischen und chromolytischen Methoden

Summary:The determination of -amylase with 2-chloro-4-nitrophenyl-ß-Z)-maltoheptaoside äs Substrate was evaluated. The molar lineic absorbance of the liberated product, 2-cliloro-4-nitrophenol, depends on the concentration of the protein present in the test. The catalytic activity concentrations obtained with human native sera, urines and commercial test sera were compared with activity concentrations determined using Substrates with the same carbohydrate chain length. The analytical agreement is acceptable for human sera and urines.

Section: Resultssupporting

confidence: 94%

The Determination of α-Amylase with 2-Chloro-4-nitrophenyl-β-D-maltoheptaoside äs Substrate: Comparison with other Methods

Hafkenscheid¹,

Hessels²

1985

“…The The same problem occurred with control sera äs already stated for some other Substrates (29,40). Table 6 lists the differences of relative reaction velocities among control materials from human, porcine, and bovine sources, viz.…”

Section: Specificitymentioning

confidence: 55%

“…Previous studies (4,(28)(29)(30) demonstrated that measurements of α-amylase via NADH formation were affected by α-glucosidase and by some metabolites, especially in urines. However, the quality of those test kits has improved, and only a few batches of test B (maltotetraose) were susceptible to pyruvate, 2 Tab.…”

Section: Interferencesmentioning

confidence: 99%

Evaluation of α-Amylase Assays with 4-Nitrophenyl-α-oligosaccharides as Substrates

Lorentz¹

1983

Measurements of -amylase with 4-nitrophenyl glucosides offer the following advantages over methods that rely on the formation of NADH: a short lag phase, no apparent interference by metabolites and enzymes of the sample and extremely stable Substrates with low blank values. The intrinsic sensitivity of nitrophenyl formation was equal to that of hydrolysis of maltotetraose, but was less than that of glucose-producing methods using oligosaccharides. In contrast to starch, the chromogenic Substrates are more rapidly hydrolysed by salivary than by pancreatic amylase.Disadvantages of these Substrates are:higher turnover by animal than by human amylases, and a marked susceptibility of the chromophore to small changes of pH and protein concentration. Some analytical qualities such äs specificity, accuracy, precision, stability of the Substrate and linear ränge are described in detail and compared with those of other methods. Bewertung von Methoden zur Bestimmung von a-Amylase mit 4-Nitrophenyl-a-oligosacchariden als SubstratenZusammenfassung: -Amylase-Bestimmungen mit 4-NitrophenyIglucosiden sind Methoden, die auf einer Reduktion von NAD beruhen, durch eine kürzere lag phase, fehlende Störung durch Metaboliten und Enzyme der Probe und durch außerordentlich haltbare Substrate mit niedriger Leerreaktion überlegen. Die Empfindlichkeit der Nitrophenolbildung entspricht der Spaltung von Maltotetraose, sie bleibt jedoch hinter dem Entstehen von Glucose aus Oligosacchariden zurück. Im Gegensatz zu Stärke werden die chromogenen Substrate schneller durch Speichel-als durch Pankreasamylase abgebaut.Nachteile ihrer Verwendung sind ein höherer Umsatz durch Amylasen tierischer Herkunft im Vergleich zu menschlichen Enzymen und der starke Einfluß geringer Veränderungen der Proteinkonzentration und des pHWertes im Ansatz. Im einzelnen werden die Spezifität, Richtigkeit und Präzision dieser Verfahren, die Haltbarkeit ihrer Substrate, der lineare Meßbereich und ein Vergleich mit anderen Methoden beschrieben.

“…Glucose wird mit Hexokinase und Glucose-6-phosphat-dehydrogenase (Coenzym: NAD) bestimmt (1,2). l ml Reagenz wird in einer l cm Küvette mit 10 Serum oder 10 Urinverdünnung (l Volumen Urin +2 Volumina Natriumchloridlösung (162 mmol/1) gemischt) und die Absorptionszunahme bei 334 nm nach 10 min Inkubation bei 25 °C kontinuierlich gemessen.…”

Section: Reaktionsprinzipunclassified

Die kinetische Bestimmung der α-Amylase im Serum und Urin mit einem Oligosaccharid als Substrat Modifikation für einen vollmechahisierten Enzymmeßplatz

Henkel¹

1979

Self Cite

Zusammenfassung: Es wird über eine Modifikation und Adaptation der UV-Methode UltraZyme Plus -Amyl Harleco an den Eppendorf-Enzymautomaten 5010 berichtet.Aus einem Oligosaccharidgemisch entsteht durch -Amylase Maltose, die durch -Glucosidase zu Glucose gespalten wird. Durch die Hexokinase-und NAD-abhängige Glucose-6-phosphat-dehydrogenase-Reaktion wird Glucose spezifisch erfaßt. Durch Zusatz von Pyruvat, Lactat-dehydrogenase und ATP wird das durch den Abbau hoher Konzentrationen endogener Glucose, z.B. im Harn, entstandene NADH zu NAD oxidiert. Durch Oxamatzusatz wird die Lactat-dehydrogenase-Reaktion gestoppt und danach die -Amylase-Aktivität ermittelt. Bei einem Mittelwert von 65 U/l beträgt der VK in der Serie 4,02 %, die relative Standardabweichung von Tag zu Tag 6,3 %. Kinetic determination ofa-amylase in serum and urine with an oligosaccharide as substrate -Modification for a fully mechanized enzyme measuring deviceSummary: The author reports a modification of the UV method UltraZyme Plus -Amyl Harleco and the adaptation to the Eppendorf Enzymautomat 5010.-amylase acts on an oligosaccharide mixture yielding maltose, which is hydrolysed by -glucosidase. The liberated glucose is determined specifically by the hexokinase/glucose-6-phosphate dehydrogenase (NAD + -dependent) method. NADH, resulting from the reaction of high concentrations of endogenous glucose, e.g. in urine, is oxidized to NAD* by addition of pyruvate, lactate dehydrogenase and ATP. Thereafter the lactate dehydrogenase reaction is stopped by addition of oxamate and the -amylase activity is measured.