Kedi Oositlerinin In Vitro Olgunlaştırılması ve Kumulus Hücrelerinin Apoptoz Oranları Üzerine, Ovaryum Taşıma ve Saklama Sıcaklığının Etkisi

Abstract

The objective of the present study was to examine the effects of two different transport temperature (37°C vs 4°C) and cold storage of ovaries for 24 h on cumulus cell apoptosis and maturation rates of cat oocytes in vitro. Ovaries were collected from 15 ovariohysterectomized domestic cats and maintained and transported to the laboratory in phosphate buffer saline at 37°C and 4°C. In order to determine the effects of storing time, some ovaries transported at 4°C were stored at the same temperature for 24 h. Selected cumulus oocyte complexes (COCs) were matured for 48 h at 38°C in four-well petri dishes containing 500 μL of modified oviduct medium (mSOF) under mineral oil in a 5% CO2 incubator with nearly 100% humidified. The morphological features of apoptosis were analysed in the cumulus cells at the beginning of in vitro maturation in both transporting temperature groups and after 24 h of cold stored group. The degree of apoptosis in cumulus cells were measured by terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). The IVM rates of oocytes were determined using Hoechst (33342) staining. Although the apoptotic morphological features were seen rarely and in similar rates in 37 and 4°C transporting groups (19.40 and 21.55%, P>0.001), it was seen more intensely in the 24 h cold stored group (34.80%, P<0.001). The IVM findings were similar (49.77, 44.55%) at 37°C and 4°C groups (P>0.05), and importantly lower at 4°C transporting and 24 h cold stored groups (18.90%, P<0.05). In conclusion, the results of this study suggest that (I) cumulus cells of cat oocytes are partially exposed to apoptosis during transportation at warm or cold temperature, (II) storing of ovaries for 24 h at 4°C causes apoptosis of the cumulus cells at much higher rates and (III) storing of ovaries for 24 h at 4°C affects negatively IVM rate of oocytes. Keywords: Cat, Ovary, Transport temperature, Oocyte, Cumulus, Apoptosis Kedi Oositlerinin In Vitro Olgunlaştırılması ve Kumulus Hücrelerinin Apoptoz Oranları Üzerine, Ovaryum Taşıma ve Saklama Sıcaklığının Etkisi ÖzÇalışmanın amacı, ovaryumların iki farklı sıcaklıkta (37°C ve 4°C) taşınma ve soğukta 24 saat bekletilmenin kumulus hücrelerindeki apoptoza ve kedi oositlerinin in vitro olgunlaşma oranları (IVM) üzerine etkilerini incelemektir. Kısırlaştırılmış 15 kediden ovaryumlar alındı ve yarısı 37°C, diğer yarısı da 4°C'de olmak üzere, fosfat tampon tuzlu solüsyonunda (PBS) laboratuara taşındı. Soğukta bekletmenin etkilerini belirlemek içinse, 4°C 'de taşınan ovaryumların yarısı, aynı sıcaklıkta olmak üzere 24 saat bekletildi. Seçilen kumulus oosit kompleksleri (COCs), %100'e yakın nemin sağlandığı %5 CO2'li inkübatörde mineral yağ altındaki 500 μL modifiye Sentetik Ovidukt Medyumu (mSOF) içeren dört gözlü petrilerde olmak üzere 38°C'de 48 saat süreyle olgunlaştırıldı. Apoptozun etkileri, hem iki farklı taşıma grubunda, hem de soğukta 24 saat bekletilen grupta olmak üzere in vitro olgunlaşmanın hemen öncesinde kumulus hücrelerinde test edildi. Apoptosis derecesi...

Laktasyodaki Simental İneklerde Follikül Aspirasyonu Zamanında Tek Bir Ultrason Muayenesi ile Tahmin Edilen Dominant Follikül Varlığı veya Yokluğunun Süperovulatör Cevaplar ve Embriyo Üretimi Üzerindeki Etkileri

“…One of the most important advantages of using embryo transfer is acceleration of the dissemination of desirable genetics by increasing the number of offspring obtained from donors with high genetic value [20][21][22][23] . It has been well known that the presence of a DF at the start of superstimulatory treatments represses the growing of subordinate follicles and affects the superovulatory response and embryo quality negatively [4] .…”