Isolamento, diferenciação e aspectos bioquímicos de células-tronco de líquido amniótico

Abstract

RESUMOAs células-tronco mesenquimais (MSCs) são células com grande potencial de diferenciação e estão sendo recentemente introduzidas na clínica para tratamento de várias doenças. Possuem várias vantagens incluindo sua estabilidade fenotípica in vitro. OBJETIVO. isolamento das MSCs de líquido amniótico, sua expansão e a demonstração da sua capacidade de se diferenciar em células miogênicas e adipogênicas, sem alterar a estabilidade cromossomal em meio de cultura. MÉTODOS. a fim de avaliar a mudança funcional destas células, foram avaliados parâmetros bioquímicos nas células adipogênicas já diferenciadas e antes da diferenciação através da dosagem de triglicérides. A diferenciação em células musculares foi avaliada comparando os níveis de creatinofosfoquinase -CK, desidrogenase lática -LDH e aldolase produzidas por estas células antes e após diferenciação. RESULTADOS. os níveis de triglicérides foram significativamente maiores nas células diferenciadas, mostrando ainda a formação de grânulos intracitoplasmáticos. Todos os outros valores obtidos foram significativamente maiores nas células miogênicas diferenciadas quando comparadas às não diferenciadas. CONCLUSÃO. os resultados sugerem que estes protocolos podem ser usados para avaliar diferenciação de células-tronco em células adipogênicas e miogênicas, e que o líquido amniótico pode ser uma fonte para obtenção destas células.UNITERMOS: Células-tronco mesenquimais. Líquido amniótico. Triglicérides. Creatinofosfoquinase (Creatina quinase). Desidrogenase lática (L-lactato desidrogenase). Aldolase (Frutose-bifosfato aldolase). ISOLAMENT INTRODUÇÃOAs células-tronco são definidas como células com grande capacidade de diferenciação. Durante o desenvolvimento embrionário, as células-tronco do blastocisto dão origem às células progenitoras que se tornam progressivamente restritas às células especializadas. As células-tronco também estão presentes em tecidos maduros, sendo denominadas de células-tronco adultas, e também contribuem para o desenvolvimento pós-natal por substituir células já diferenciadas que são perdidas devido à injúria, apoptose programada ou turnover fisioló-gico 1 . As células-tronco adultas não somente possuem a capacidade multipotente, como também pluripotente, como foi demonstrado em trabalhos com camundongos, no qual células-tronco hematopoiéticas derivadas da medula óssea foram capazes de regenerar tecido muscular esquelético lesionado quimicamente 2 . Neste mesmo trabalho também foi possível verificar a capacidade dessas células de migrarem da medula para as regiões lesionadas.As células-tronco mesenquimais (CTM) correspondem a uma população de células progenitoras multipotentes capazes de atuarem na hematopoiese e se diferenciarem em tecidos mesenquimais, como células das linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica 3,4 .Estas células têm sido utilizadas com bastante otimismo na medicina regenerativa e engenharia tecidual, como o desenvolvimento de células musculares, regeneração hepática e formação de células do sistema nervoso central 5 ....

Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais

“…Muitos outros estudos descreveram a expressão de Oct-4 (You et al 2009, Steigman et al 2009, Phermthai et al 2010) e capacidade de diferenciação em muitas linhagens celulares (De Coppi et al 2007, Peister et al 2008, Antonucci et al 2009, Cabral et al 2009 tais como osteogênica, condrogênica, adipogênica, miogênica, neurogênica, endotelial e hepática das LA-CTMs humana. Além disso, as células não apresentaram alterações em seu cariótipo após o cultivo (Cabral et al, 2009), não induziram a formação de tumores quando foram transplantadas (You et al 2009, Phermithai et al 2010) e apresentaram 80% de viabilidade após 5 meses de criopreservação (Steigman et al 2008). Apesar da grande maioria das pesquisas serem realizadas com amostras colhidas durante a amniocentese para ensaio citogenético dos fetos no quarto mês de gestação, estudos realizados com amostras colhidas durante a cesariana a termo obtiveram o mesmo padrão de resultados (Steigman et al 2009, You et al 2009.…”

A Utilização de Células-tronco em Doenças Cardíacas: Apresentação dos Estudos Publicados no Brasil

“…Segundo Zatz (2004), estas células são derivadas apenas de embriões, que podem ser obtidos através da clonagem ou fecundação até o estágio blastocístico (NARDI, 2007;PAYÃO;SEGATO;SANTOS, 2009;BYDLOWSKI et al, 2009;OLIVEIRA et al, 2011;BARBOSA et al, 2013;CABRAL et al, 2008).…”

“…Nesta fase dois grupos se formam a partir das células do embrião: um grupo que será precursor das células que darão origem ao embrião propriamente dito, e outro grupo de células que darão origem à placenta e aos anexos embrionários, ou seja, órgãos necessários para o desenvolvimento do embrião (BARBOSA et al, 2013;ZATZ, 2004;PEREIRA, 2008).…”

“…São aquelas que possuem a capacidade de se diferenciar em células que possuem formas características e funções especializadas, obtidas após o estágio blastocístico do embrião. Estas células também são conhecidas como células somáticas ou células-tronco não embrionárias e podem ser encontradas no cordão umbilical, placenta, medula óssea, sangue, fígado, músculos esqueléticos e polpa dentária de crianças e adultos (BARBOSA et al, 2013;ZATZ, 2004;PEREIRA, 2008).…”

“…Deus et al (2012) destacam que estas células-tronco mesenquimais são obtidas principalmente da medula óssea, porém há relatos de caso destas células terem sido isoladas de cordão umbilical, fluido amniótico, tecido adiposo, músculo e fígado. Elas possuem a capacidade de se diferenciar em várias linhagens de células como células musculares, células epiteliais, células neurais, hepatócitos, tecido conjuntivo, ossos, entre outros (BYDLOWSKI et al, 2009;CABRAL et al, 2008;ARGOLO NETO;CARLO, 2010).…”