Isoenzymatic Characterization of Colombian Strains of Trypanosoma cruzi

Rodríguez, Patricia Hernández; Montilla, Marleny; Nicholls, Santiago; Zarante, Ignacio; Puerta, Concepción J.

doi:10.1590/s0074-02761998000600008

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“…En este trabajo se realizó un análisis de variabilidad de seis cepas colombianas de T. cruzi mediante RAPD (cebadores M13F y M13R) y RFLP (gen de la histona H2A, unidades de 1,2 y 0,76 kb, endonucleasas: EcoRI, BamHI, KpnI, BstEII y StyI), como ampliación de un estudio previo de isoenzimas (15). Si bien Saravia et al (25), Márquez et al (26) y Ruiz et al (27), entre otros, han estudiado la variabilidad genética de un mayor número de cepas colombianas, estos estudios se han centrado en el análisis de los patrones isoenzimáticos, metodología superada por el RAPD para la determinación de polimorfismo y correlación con el comportamiento biológico de cepas del parásito (28).…”

Section: Discussionunclassified

“…Todas las cepas estudiadas habían sido caracterizadas previamente por isoenzimas y correspondieron al zimodema I (15). Los epimastigotes se cultivaron en medio REI modificado, suplementado con 2% de suero bovino fetal (SBF) y 100 mg/ml de gentamicina a 24 °C.…”

Section: Materiales Y Métodos Parásitosunclassified

“…Estudios previos de nuestro laboratorio demostraron variabilidad isoenzimática en siete cepas colombianas de T. cruzi, con un máximo de cuatro alelos diferentes por locus (15). En este trabajo se extendió dicho estudio de variabilidad al análisis de polimorfismo del ADN usando las técnicas de RAPD y RFLP y comparando los hallazgos obtenidos con los resultados del análisis isoenzimático.…”

unclassified

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Estudio de la variabilidad de seis cepas colombianas de Trypanosoma cruzi mediante polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD).

Rodríguez¹,

Escalante²,

Díez³

et al. 2002

biomedica

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La enfermedad de Chagas, causada por el hemoflagelado Trypanosoma cruzi, constituye un problema de salud pública en Colombia en donde diferentes informes indican la presencia de heterogeneidad entre poblaciones del parásito. En este estudio se analizaron seis cepas colombianas de T. cruzi, procedentes de distintas regiones geográficas del país, huéspedes y ciclos de transmisión, mediante las técnicas de amplificación aleatoria de ADN polimórfico (Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD), isoenzimas y polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (Restriction Fragment Length Polymorphisms, RFLP), usando como sonda el gen de 1,2 kb que codifica para la histona H2A del parásito. Se encontró que las distancias genéticas entre los aislados varían considerablemente, ubicándose en el rango de 0,61 a 0,99, para el caso de los perfiles de RAPD (cebadores M13F y M13R), de 0 a 0,81, para el caso de los perfiles de RFLP (5 endonucleasas) y de 0,10 a 0,55, para el caso de las isoenzimas (13 sistemas enzimáticos). El elevado grado de variabilidad exhibido por los aislados colombianos del parásito podría estar implicado en el amplio espectro clínico de presentación de la enfermedad de Chagas en Colombia.Palabras clave: Trypanosoma cruzi, RAPD, RFLP, histona H2A, isoenzimas, polimorfismo. Genetic variability in six Colombian Trypanosoma cruzi strains detected by restriction fragment length polymorphisms (RFLP) and random amplified polymorphic DNA (RAPD)Chagas disease, caused by the hemoflagellate Trypanosoma cruzi, is a public health problem in Colombia. Previous reports have indicated the presence of heterogeneity among parasite populations. Six Colombian T. cruzi strains were obtained that differed by host, geographical region and transmission cycle. The genetic variability of each was compared by random amplified polymorphic DNA (RAPD), and isoenzymes. A restriction fragment length polymorphism (RFLP) was extracted using the 1.2 kb unit encoding the parasite's H2A histone as a probe. Genetic distances between the isolates varied greatly, from 0.611 to 0.99 as determined by RAPD profiles (M13F and M13R primers), between 0 and 0.81 by RFLP profiles ( 5 endonucleases), and between 0.10 and 0.55 by isoenzymes (13 enzymatic systems). Genetic distance matrixes derived from each of the three methods showed that Colombian strains exhibit a high degree of genetic differentiation. This may account for the broad clinical spectrum of Chagas disease in Colombia.

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Section: Discussionunclassified

Section: Materiales Y Métodos Parásitosunclassified

unclassified

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Estudio de la variabilidad de seis cepas colombianas de Trypanosoma cruzi mediante polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD).

Rodríguez¹,

Escalante²,

Díez³

et al. 2002

biomedica

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“…These strains were provided by Laboratorio de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, (INS) (Bogotá, Colombia). Both parasites species were characterized by isoenzymes 24 and PCR using miniexon and minicircle sequences as targets 5,31,33 . The bulk parasite mass was cultivated in REI modified liquid medium, supplemented with 2% FCS and 100 µg/mL of gentamicin, and incubated at 24 °C.…”

Section: Parasitesmentioning

confidence: 99%

Detection of Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli infection in triatomine vectors by amplification of the histone H2A/SIRE and the sno-RNA-C11 genes

Pavía

Vallejo

Montilla

et al. 2007

Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo

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SUMMARYTrypanosoma rangeli is non pathogenic for humans but of important medical and epidemiological interest because it shares vertebrate hosts, insect vectors, reservoirs and geographic areas with T. cruzi, the etiological agent of Chagas disease. Therefore, in this work, we set up two PCR reactions, TcH2AF/R and TrFR2, to distinguish T. cruzi from T. rangeli in mixed infections of vectors based on amplification of the histone H2A/SIRE and the small nucleolar RNA Cl1 genes, respectively. Both PCRs were able to appropriately detect all T. cruzi or T. rangeli experimentally infected-triatomines, as well as the S35/S36 PCR which amplifies the variable region of minicircle kDNA of T. cruzi. In mixed infections, whereas T. cruzi DNA was amplified in 100% of samples with TcH2AF/R and S35/S36 PCRs, T. rangeli was detected in 71% with TrF/R2 and in 6% with S35/S36. In a group of Rhodnius colombiensis collected from Coyaima (Colombia), T. cruzi was identified in 100% with both PCRs and T. rangeli in 14% with TrF/R2 and 10% with S35/S36 PCR. These results show that TcH2AF/R and TrF/R2 PCRs which are capable of recognizing all T. cruzi and T. rangeli strains and lineages could be useful for diagnosis as well as for epidemiological field studies of T. cruzi and T. rangeli vector infections.

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“…Se trabajó con las cepas H14 (MHOM/Hond/H14), Choachí (IRHO/CO/86/Choachí) y Tre de T. rangeli y las cepas Shubacbarina (IRHO/CO/95/ Shubacbarina) y Munantá (IRHO/CO/85/Munantá) de T. cruzi (18,19). Estas cepas se caracterizaron mediante su patrón de isoenzimas (20) y la amplificación de los minicírculos con los oligonucleótidos S35/S36/KP1L (2).…”

Section: Materiales Y Métodos Parásitosunclassified

Localización cromosómica de los genes KMP-11 en cepas KP1(+) y KP1 (-) de Trypanosoma rangeli.

et al. 2004

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Isoenzymatic Characterization of Colombian Strains of Trypanosoma cruzi

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Estudio de la variabilidad de seis cepas colombianas de Trypanosoma cruzi mediante polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD).

Estudio de la variabilidad de seis cepas colombianas de Trypanosoma cruzi mediante polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD).

Detection of Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli infection in triatomine vectors by amplification of the histone H2A/SIRE and the sno-RNA-C11 genes

Localización cromosómica de los genes KMP-11 en cepas KP1(+) y KP1 (-) de Trypanosoma rangeli.

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