Herstellung von Seren gegen ein thermolabiles Antigen von <i>Shigella sonnei</i> und ihre immunelektrophoretischen Untersuchungen

In einer friiheren Mitteilung (SELTMANN 1971) hatten wir iiber die Entdeckung, Isolierung und Reinigung eines allen untersuchten gramnegativen Bakterien genieinsamen thermolabilen Antigens berichtetl). W r koniiten nun mit Hilfe der Affinitfitschromatographie die Reinigung des ATA in einer einzigen Immunclcktrophoretisch wurden Ultraschallextrakte verschiedener Euterohacteriaceae gegen mit den1 Stamm Shigella sonnei 2882/67 K K + z, hergest'elltes Kaninchenseruni (KUHN et al. 1972) getestet. Dabei stellte sich heraus, daB der Ultraschallextrakt von Proteus mirabilis 1095/67 nur einen Prazipitationsbogen mit diesem Serum ausbildet.. Auf Grund dieser nur das ATA betreffenden Vtrwandschaft wurden die Ant>ikorper aus dem Serum a n mit Bromcyaii aktiviert,e Sepharose 4 B als Mat,rix gekuppelt und das ATA affinitatschromatographisch aus dem Proteus m.irahilis-Ult.raschallextrakt isoliert. Prinzipiell 1aBt sich das ATA mit dieser Methode aus allen Enterohacteriaceae mit mehr oder wrniger groBcr Reinheit isolieren. Herstellung der Antikorpersgule: Sepharose 4 B wurde in der ublichen Weise (AXEN et al. 1967, 1971) niit Brorncyan aktiviert und danii mit dem nach KUHN et al. (1972) durch Immunisierung von Kaninchen mit dem Stamm Sh. son& 2882/67 K K + erhaltenen Vollserum bzw. der y-Globulinfraktion durch 24 Std.langes Riihren bei +4 "C in Boratpuffer p H 8,7 gekuppelt. An 50 nil gequollene Sepharose 4 B wurden so 504 mg Proteiil aus dar y-Globulinfraktion angekniipft (98% des vorhandenen Proteins). Nach HJELM et al. (1972) wurden durch Riihreri uber Nacht bei +4 "C mit 0,05 M Athanolamin in 0,2 M NaHCO, (pH 9,O) die noch vorhandenen reaktiverl Stellen der Sepharose abgesattigt. AnschlieBend wurde intensiv mit 0 , l M KH,PO, pH 7,O gewaschen. Die Saule zeigte nach einmoiiatigem Aufbewahren bei +4 "C in diesem Puffer keinen merklichen Aktivitatsverlust. Alle verwendeten Pufferlosungen waren mit 0,0274 NaN, versetzt. l) Zur Abgrenzung von anderen thermolabilen Antigenen schlagen wir fur dieses den 2, KK+ = Stamm gibt eine positive Keratokonjunktivitis-Reaktion im Meerschwein-Begriff anodisch wanderndes thermolabiles Antigen (ATA) Tor. chenauge.

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Reinigung eines thermolabilen, in gramnegativen Bakterien vorkommenden Antigens (ATA) mit Hilfe der Affinitätschromatographie

Seltmann

Reissbrodt

1974

J of Basic Microbiology

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Abhängigkeit der Ausbildung bestimmter Antigene von Proteus mirabilis Stamm 1095/67 beim Wachstum auf Minimalnährmedien

Reissbrodt

Kemmer

Seltmann

1975

J of Basic Microbiology

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Proteus mirabilis strain 1095167'has been cultivated in surface culture on different minimal media, which were composed either of single amino acids or combinations of several amino acids without or with stepwise addition of other C-sources u p to the complete medium. We found a direct dependence of the formation of the various antigens (moving t o the cathode, to the anode, or not moving) on the composition of the medium.Certain amino acids (Ala, Glu, Asp, Ser) elicit only parts of the antigenic spectrum formed in complete medium, but enrich special antigens. With only 2 amino acids (Ala and Glu) and the vitamins thiamine, pyridoxal, and niacine in the anorganic basic medium the complete antigenic spectrum can be formed. We have shown that the composition of the cell wall varies with the composition of the culture medium.

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The anodically‐moving thermolabile antigen (ATA) of gram‐negative bacteria: Its function as the receptor for F pili

Reissbrod

Tschäpe

Seltmann

1976

J of Basic Microbiology

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The anodically-moving thermolabile antigen ATA of protein nature, present in the cell wall of all members of Enterobacteriaceae and other gram-negative bacteria tested, seems to be the F pili target on the recipient cell sufrace.The conjugal transfer of plasmids is strictly dependent on the presence of sex pili determined by the donor cell. A specific reaction between the pili and a receptor site on the cell surface is thought t o be the initial step in the conjugation process that induces all following events. The existence of such specific receptors for the sex pili function is postulated by KERN ( This paper presents experiments suggesting that ATA may be the receptor for F pili. Material and methodsBacterial strains and plasmids: The bacterial strains and plasmids used in the experiments are listed in Tables 1 and 2. They all came from the culture collection of this institute.Bacteriophages: The bacteriophages used in these experiments are listed in Table 3. They also came from the culture collection of this institute.Nutrient media: Nahragar I and Nahrbouillon I are commercial products (SIFIN, BerlinWeillensee, GDlt) as is Bacto nutrient broth (DIFCO Laboratories Inc., Detroit, USA). My-medium and water blue-glucose-agar used in conjugation experiments were described by CLOWES and HAYES (1968) and KIESEWALTER and SELTMANN (1968), respectively.Production of sera and y-globulin fractions: The serum containing the complete antibody spectrum ("complete serum") and the serum containing the complete spectrum, except the anti-ATA antibodies ("ATA minus serum") were obtained by immunization of rabbits with the strains Bhigella sonnei 2882167 and Proteus mirabilis 1095167, resp. (cf. KUHN et al. 1972). The serum containing antibodies only against ATA ("monospecific anti-ATA serum") was prepared by immunizing rabbits with purified ATA (REISSBRODT, unpubl.) ; the monospecificity of thi serum was tested against the complete ultrasonic extract of Proteus mirabilis 1095/67. The idens

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