Reinigung eines thermolabilen, in gramnegativen Bakterien vorkommenden Antigens (ATA) mit Hilfe der Affinitätschromatographie

Abstract

In einer friiheren Mitteilung (SELTMANN 1971) hatten wir iiber die Entdeckung, Isolierung und Reinigung eines allen untersuchten gramnegativen Bakterien genieinsamen thermolabilen Antigens berichtetl). W r koniiten nun mit Hilfe der Affinitfitschromatographie die Reinigung des ATA in einer einzigen Immunclcktrophoretisch wurden Ultraschallextrakte verschiedener Euterohacteriaceae gegen mit den1 Stamm Shigella sonnei 2882/67 K K + z, hergest'elltes Kaninchenseruni (KUHN et al. 1972) getestet. Dabei stellte sich heraus, daB der Ultraschallextrakt von Proteus mirabilis 1095/67 nur einen Prazipitationsbogen mit diesem Serum ausbildet.. Auf Grund dieser nur das ATA betreffenden Vtrwandschaft wurden die Ant>ikorper aus dem Serum a n mit Bromcyaii aktiviert,e Sepharose 4 B als Mat,rix gekuppelt und das ATA affinitatschromatographisch aus dem Proteus m.irahilis-Ult.raschallextrakt isoliert. Prinzipiell 1aBt sich das ATA mit dieser Methode aus allen Enterohacteriaceae mit mehr oder wrniger groBcr Reinheit isolieren. Herstellung der Antikorpersgule: Sepharose 4 B wurde in der ublichen Weise (AXEN et al. 1967, 1971) niit Brorncyan aktiviert und danii mit dem nach KUHN et al. (1972) durch Immunisierung von Kaninchen mit dem Stamm Sh. son& 2882/67 K K + erhaltenen Vollserum bzw. der y-Globulinfraktion durch 24 Std.langes Riihren bei +4 "C in Boratpuffer p H 8,7 gekuppelt. An 50 nil gequollene Sepharose 4 B wurden so 504 mg Proteiil aus dar y-Globulinfraktion angekniipft (98% des vorhandenen Proteins). Nach HJELM et al. (1972) wurden durch Riihreri uber Nacht bei +4 "C mit 0,05 M Athanolamin in 0,2 M NaHCO, (pH 9,O) die noch vorhandenen reaktiverl Stellen der Sepharose abgesattigt. AnschlieBend wurde intensiv mit 0 , l M KH,PO, pH 7,O gewaschen. Die Saule zeigte nach einmoiiatigem Aufbewahren bei +4 "C in diesem Puffer keinen merklichen Aktivitatsverlust. Alle verwendeten Pufferlosungen waren mit 0,0274 NaN, versetzt. l) Zur Abgrenzung von anderen thermolabilen Antigenen schlagen wir fur dieses den 2, KK+ = Stamm gibt eine positive Keratokonjunktivitis-Reaktion im Meerschwein-Begriff anodisch wanderndes thermolabiles Antigen (ATA) Tor. chenauge.