Державна установа «Інститут патології крові та трансфузійної медицини НАМН України», Львів, Україна Резюме Актуальність. Фракціонування білків плазми крові залишається важливим біотехнологічним підходом з метою одержання терапевтичних препаратів, необхідних для лікування низки хвороб людини, особливо захворювань крові. Для забезпечення оптимальної терапії пацієнтів останніми роками особливо розвивалась технологія виробництва білків плазми крові, зокрема фактора зсідання VIII (FVIII). Основним промисловим методом отримання плазмового препарату FVIII був і залишається метод іонообмінної хроматографії. Стаття присвячена розробці нової технології одержання очищеного препарату FVIII зсідання крові, яка поєднує методи фракціонування, іонообмінної та барвник-лігандної хроматографій. Мета роботи: розробка методу одержання високоактивного препарату фактора VIII зсідання крові із застосуванням біоспецифічних кремнеземних сорбентів із іммобілізованими активними барвниками. Матеріали і методи. Фракціонування, іонообмінна та барвник-лігандна хроматографії. Результати. Створено нову технологію отримання високоочищеного препарату FVIII зсідання крові. Продемонстровано, що використання іонообмінної та барвник-лігандної афінної хроматографії дозволяє отримати FVIII з Кріопреципітату зі ступенем очищення від 129 до 242 разів та збереження до 73-76% початкової активності. Явище негативної афінної сорбції забезпечує майже 96% вихід продукту, а основні втрати від початкової активності FVIII (до 27%) відбулися саме на стадії іонообмінної хроматографії. Було встановлено, що комбінація стадій попередньої фракціонування, іонообмінної та афінної хроматографії забезпечує ступінь очищення 239-700 разів, залежно від типу сорбенту. Висновки. Створена нова технологія очищення FVIII зсідання крові. Отримано препарат FVIII з максимальною специфічною активністю (50,58 ±1,68) МО/мг білка.Ключові слова: фракціонування плазми; хроматографія; активні барвники, фактор VIII зсідання крові.
AbstractBackground. The fractionation of human plasma remains important method the biotechnological approach to make life-saving protein therapeutics required to treat many human diseases, especially blood diseases. The technology for the production of blood plasma proteins, in particular factor VIII coagulation (FVIII), have evolved in the last few years to provide optimized therapy to patients. The ion-exchange chromatography remains a main method of obtaining of plasma concentrate of FVIII. The active dyes are important alternatives to natural ligands for specific affinity chromatography. The paper is devoted to development of a new method to obtain purified preparation of the blood coagulation FVIII in combination with fractionation methods, ion exchange and affinity dye-ligand chromatography. Purpose of the study: to develop a method of obtaining of highly active concentrate of blood coagulation FVIII with the use of affinity chromatography on dye-silica carriers.Materials and methods. Precipitation of proteins, ion-exchange chromatography and dye-ligands affini...