Genetic counseling of medullary breast cancer patients

Kroupis, Christos; Lianidou, Evi; Goutas, Nikolaοs; Vasilaros, S; Yannoukakos, Drakoulis; Petersen, Maj

doi:10.1111/j.1399-0004.2003.00231.x

Cited by 5 publications

(1 citation statement)

References 13 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…Επίσης το 30% των PALB2 καρκίνων είναι TNBC (161) (αρκετά αυξημένο σχετικά με τον σποραδικό), ένα χαρακτηριστικό που υποδεικνύει ομοιότητα με τους BRCA1 όγκους (165), παρόλο που οι PALB2 όγκοι φαίνεται να έχουν ιδιαίτερα ποικίλο φαινότυπο και περισσότερο τα χαρακτηριστικά τους κλίνουν προς αυτά των BRCA2 όγκων.Έτσι, στρέψαμε την προσοχή μας στον μυελοειδή καρκίνο με σκοπό να εντοπίσουμε κάποια συσχέτιση του PALB2 γονιδίου μ' αυτό το είδος καρκίνου. Ο μυελοειδής καρκίνος του μαστού είναι ένας σπάνιος ιστοπαθολογικός υπότυπος (1-2% όλων των περιπτώσεων) ο οποίος είναι αξιοσημείωτα αυξημένος στους BRCA1 όγκους σε σχέση με τους BRCA2 όγκους και τους σποραδικούς (13%, 3%, 2% αντίστοιχα)(166)(167)(168)(169)(170) και θα ήταν ενδιαφέρον να ελεγχθεί για PALB2 μεταλλάξεις. Ο ιδιαίτερος αυτός ιστολογικός τύπος καρκίνου μαστού με κριτήρια που έχουν καταγραφεί (171) έχει σαφώς περιγραμμένα όρια και ιδιαίτερα κυτταρικά στοιχεία ανοσολογικής απάντησης, είναι συνήθως triple negative (TNBC) και εμφανίζει υπερέκφραση του p53.…”

unclassified

Μελέτη Και Κλινική Αξιολόγηση Νέων Μοριακών Δεικτών Καρκίνου Του Μαστού

Poumpouridou¹

View full text Add to dashboard Cite

Πρόσφατες μελέτες συμπεριλαμβάνουν το γονίδιο PALB2 (Partner and localizer ofBRCA2) στην συνεχώς αυξανόμενη λίστα των γονιδίων κληρονομούμενου καρκίνου του μαστού. Εντοπίζεται στη χρωμοσωμική περιοχή 16p12.1 και αποτελείται από 13 εξόνια που μεταγράφουν mRNA περίπου 3,5 Kb που κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη 1186 αμινοξέων. Τα εξόνια 4 και 5 είναι αισθητά μεγαλύτερα από όλα τα άλλα (65 % του γονιδίου). Οι παθογνωμικές μεταλλάξεις του προσδίδουν έναν σοβαρό κίνδυνο καρκίνου του μαστού στους ετεροζυγώτες και αναιμία Fanconi στους φορείς διαλληλικών μεταλλάξεων (γι’ αυτό αλλιώς ονομάζεται και FANCN). Οι μεταλλάξεις του είναι σπάνιες και έχουν ανιχνευθεί στο 1-2 % των BRCA αρνητικών γυναικών με καρκίνο του μαστού. Η πρωτεΐνη PALB2 αποτελεί τον συνδετικό κρίκο των BRCA2 και BRCA1 που εντοπίζονται στον πυρήνα και συμμετέχει στην επιδιόρθωση των σπασιμάτων της διπλής έλικας του DNA μέσω του αλάθητου ομόλογου ανασυνδυασμού. Η σημαντική του συνεισφορά θα μπορούσε να περιοριστεί αρκετά,εκτός από την ύπαρξη μεταλλάξεων, εάν επηρεαζόταν από επιγενετικούς μηχανισμούς όπως την μεθυλίωση των CpG νησίδων του υποκινητή. Σ’ αυτή την περίπτωση, οι ασθενείς θα μπορούσαν να ωφεληθούν από θεραπευτική αγωγή μεPARP αναστολείς.Σκοπός της εργασίας ήταν: Α) η πλήρη γενετική μελέτη του γονιδίου PALB2 για την εύρεση τυχόν μεταλλάξεων σε δείγματα DNA περιφερικού αίματος ασθενών με κληρονομούμενο καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών Β) η ανάλυση έκφρασης του γονιδίου PALB2 σε δείγματα ιστού ασθενών με σποραδικό καρκίνο του μαστού για τον εντοπισμό τυχόν επιγενετικών μηχανισμών που να εμποδίζουν την έκφρασή του. Μέθοδοι. Για τη γενετική ανάλυση των μεγάλων εξονίων του γονιδίου (εξόνιο 4 και 5)αναπτύχθηκε νέα μεθοδολογία PTT (Protein Truncation Test) ενώ για τα υπόλοιπα μικρά εξόνια του γονιδίου εφαρμόστηκε μεθοδολογία HRMA. Τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν σ’ όλα τα δείγματα με την μεθοδολογία DNA Sequencing που είχε αναπτυχθεί από την ομάδα μας. Επιπλέον, το γονίδιο ελέγχθηκε και για μεγάλες γενωμικές αναδιατάξεις με την μέθοδο MLPA. Για την ανάλυση έκφρασης του γονιδίου PALB2, αναπτύχθηκαν και επικυρώθηκαν μεθοδολογίες pyrosequencing για την μελέτη μεθυλίωσης του υποκινητή του γονιδίου και RT-qPCR με ανιχνευτή TaqMan στο Light Cycler για την ποσοτικοποίηση τωνPALB2 mRNA μεταγράφων. Απομονώθηκε RNA από 91 καρκινικά δείγματα (και 4 φυσιολογικά) και παράχθηκε cDNA. Στην συνέχεια έγινε προσπάθεια επιβεβαίωσης των αποτελεσμάτων έκφρασης με PALB2 πολυκλωνικό αντίσωμα με την μέθοδο της ανοσοϊστοχημείας (IHC).Αποτελέσματα – Συμπεράσματα γενετικής ανάλυσης PALB2 γονιδίου. Κατά τη γενετική ανάλυση 57 δειγμάτων (ανάμεσά τους 15 με μυελοειδή καρκίνο του μαστού) βρέθηκε σε δύο δείγματα η παρανοηματική μετάλλαξη Q599R, σε πέντε η συνώνυμη μετάλλαξη Τ1100Τ και σε ένα μια νέα ιντρονική μετάλλαξη. Όλες θεωρούνται πολυμορφισμοί και δεν ανιχνεύθηκε παθογνωμική μετάλλαξη. Η MLPAανάλυση απέβηκε αρνητική σ’ όλα τα δείγματα. Η μελέτη αυτή είναι η πρώτη καταγεγραμμένη PALB2 γενετική ανάλυση στον σπάνιο υπότυπο των μυελοειδών καρκινωμάτων μαστού.Αποτελέσματα – συμπεράσματα έκφρασης PALB2 γονιδίου. Κατά τη μελέτη μεθυλίωσης του υποκινητή του γονιδίου δε βρέθηκε κανένα δείγμα που να είναι μεθυλιωμένο, συνεπώς η μεθυλίωση του DNA δεν φαίνεται να είναι ένας πιθανός μηχανισμός αποσιώπησης του γονιδίου. Κατά την ανάλυση έκφρασης με RTqPCR,4 δείγματα από τα 91 δεν εμφάνισαν έκφραση. Το γεγονός αυτό διερευνήθηκε περαιτέρω με πειράματα ανοσοϊστοχημείας. Κατέδειξαν μόνο κυτταροπλασματική χρώση της PALB2 πρωτεΐνης και καθόλου πυρηνική όπως αναμενόταν γεγονός που πιθανόν οφείλεται σε ελαττωματικό αντίσωμα και συνεπώς δεν μπορούσε να εξαχθεί συμπέρασμα για τον λόγο μη έκφρασης του γονιδίου. O μέσος όρος των αντιγράφων ήταν 7,23×104copies/μg ολικού RNA, ενώ η μέση τιμή ήταν 1,34×104copies/μg(εύρος 3,51×10 to 1,23×106copies/μg). Έγινε προσπάθεια συσχέτισης των επιπέδωνPALB2 mRNA με τα κλινικά και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά των όγκων που αναλύθηκαν (μέγεθος όγκου, βαθμός, λεμφαδένες, μετάσταση, ορμονικούς υποδοχείς, C-ERBB2 έκφραση) ωστόσο δεν βρέθηκε κάποιος στατιστικά σημαντικός συσχετισμός. Δεν φαίνεται λοιπόν να αποτελεί η PALB2 έκφραση καλό προγνωστικό και προβλεπτικό δείκτη.

show abstract

unclassified

Μελέτη Και Κλινική Αξιολόγηση Νέων Μοριακών Δεικτών Καρκίνου Του Μαστού

Poumpouridou¹

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

Development of a novel PTT assay for mutation detection in PALB2 large exons and PALB2 screening in medullary breast cancer

et al. 2015

View full text Add to dashboard Cite

Beyond BRCA1 and BRCA2 genes, PALB2 (Partner and localizer of BRCA2) emerges as the third breast cancer susceptibility gene due to its role in the same DNA repair pathway: homologous recombination. In most populations studied so far, PALB2 mutations are detected in 1-2% of BRCA negative female patients. PALB2 gene contains 13 exons; exons 4 and 5 consist 65% of the coding area. We developed a protein truncation test (PTT) for quick screening of truncating pathogenic mutations of these two large exons. Specific primers were de novo, in silico designed and the PTT-PCR products were translated in the presence of biotinylated lysine and detected colorimetrically. The assay was initially tested in 30 patients with hereditary breast cancer, negative for BRCA mutations and then, in 17 patients with the rare medullary breast cancer subtype. Small PALB2 exons were screened with high-resolution melting curve analysis (HRMA) and the large DNA rearrangements with multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA). Any alterations detected were verified by Sanger DNA Sequencing. The developed PTT methodology is highly specific for clinical significant mutations; positive control samples that produce truncated PALB2 peptides were correctly identified and the method was accurate when compared to DNA sequencing. We did not detect any deleterious PALB2 mutation in both groups of patients. HRMA and MLPA were also negative for all tested samples. However, our novel, fast and cost-effective PTT method for pathogenic mutation detection of the two large PALB2 exons can be applied in screening of a large number of breast cancer patients.

show abstract